中药成份PA-1脂质体制备工艺及其对人黑色素瘤细胞A375的生长抑制作用的初步探讨

摘要

中药成份PA-1是五环三萜类化合物，具有化学结构简单，抗肿瘤药理活性强，作用机制特异，相对分子质量较小等特点。有大量文献报道已经证明PA-1对黑色素瘤有抑制作用，但因为其溶解性很差，口服不吸收，做成注射剂或口服制剂存在严重的溶解度问题，这样就限制了它的临床应用。脂质体包裹技术可以解决脂溶性药物不易溶于水的难题，可以稳定制剂与提高疗效，是抗肿瘤药物的理想载体。
　　 制备PA-1脂质体，测定其含量及载药率，理化性质及初步稳定性的考察。初步探讨PA-1脂质体对人黑色素瘤A375的抑制作用。
　　 采用薄膜分散法制备PA-1脂质体，通过正交设计优化制备工艺和处方。利用透射电镜观察脂质体的形态，用激光粒度仪测定脂质体的粒径，用过滤法测定其含药量和载药率。用MTT法测定PA-1脂质体对黑色素瘤细胞的生长抑制作用。
　　 通过单因素考察，确定溶剂种类、溶剂用量、成膜水浴温度、水合介质、水浴超声温度和缓冲盐pH值。以载药率为指标，以药物与磷脂的比例，胆固醇与磷脂的比例、PBS浓度、水浴超声的时间为四个因素，得出了正交设计的最优组合：药物与磷脂的比例为1:30、胆固醇与磷脂的比例为1:10、PBS6.8浓度为0.05mol/L、水浴超声的时间20min。初步考察，从外观和过氧化值来看，PA-1脂质体在4℃和25℃储存条件下时均不稳定。从外观上看，4℃与25℃条件下放置时，第二天均有明显变化，粒子变粘，脂质体凝聚成团的现象。从过氧化值来看，4℃与25℃条件下放置的脂质体所测得的过氧化值随着天数的增加先降后升，不稳定。因此，需要加入表面活性剂来保持脂质体的稳定性。通过对几种表面活性剂的考察，吐温-80对PA-1脂质体的稳定性可以起到比较好的效果。PA-1脂质体在光镜下观察，可以见到脂质体呈现布朗运动充满视野；脂质体PA-1脂质体经透射电镜观察，粒径圆整，平均粒径为几百个纳米。接下来，我们进行了脂质体对黑色素瘤细胞作用的初步探讨，结果表明，随着给药浓度的降低，细胞的抑瘤率也呈下降的趋势，也就是说，黑色素瘤细胞的存活率与PA-1脂质体的给药浓度成反比，并且PA-1脂质体对黑色素瘤细胞的作用与PA-1相当。
　　 本文用薄膜分散法制备的脂质体外观圆整，粒径小而均匀。脂质体在4℃保存，短期内是可以保持比较高的稳定性，但是无法达到长期保存的目的，随着放置时间的延长，稳定性逐渐呈下降的趋势，所以，冷冻干燥将是我们接下来的重点。从对黑色素瘤细胞株的抑瘤率来看，脂质体对黑色素瘤细胞株的生长抑制是有效的，说明，将PA-1做成脂质体后，解决脂溶性药物难溶的问题，为它的临床应用开辟了新的道路。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：英文缩写一览表

声明

1.PA-1脂质体的制备

1.1仪器与材料

1.2方法与结果

1.2.1处方组成

1.2.2脂质体制备方法的筛选

1.2.3单因素试验初选制备条件

1.3正交设计试验优化制备工艺

1.3.1正交试验

1.3.2处方验证

1.3.3脂质体制备工艺研究结果

1.4讨论

1.5结论

2.PA-1脂质体含量及载药率测定方法的建立

2.1仪器和材料

2.2方法与结果

2.2.1 PA-1脂质体中药物含量测定方法的建立

2.2.2 PA-1脂质体载药率测定的方法学验证

2.3讨论

2.4结论

3.PA-1脂质体理化性质及初步稳定性研究

3.1仪器与材料

3.2方法与结果

3.2.1形态观察

3.2.2粒径大小及分布

3.2.3初步稳定性研究

3.3讨论

3.4结论

4.PA-1脂质体对人黑色素瘤细胞A375的生长抑制的初步探讨

4.1仪器和材料

4.2方法与结果

4.2.1方法

4.2.2结果

4.3讨论

4.4结论

参考文献

文献综述

致谢

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