金欣口服液调节RSV感染模型TNF-amRNA、SIgA表达及干预融合病变的实验研究

摘要

目的：
　　 1．通过检测RSV肺炎模型大鼠支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA含量、肺组织中TNF-α的mRNA的表达量，探讨金欣口服液体内不同给药途径干预RSV感染的相关机制。
　　 2．通过观察金欣口服液含药血清、黄芩甙、大黄素对RSV感染细胞A549的TNF-αmRNA表达的影响，探讨金欣口服液及其有效单体对RSV感染模型的TNF-α表达的影响。
　　 3．通过激光共聚焦观察金欣口服液含药血清、黄芩甙、大黄素对RSV感染细胞融合病变的影响，探讨金欣口服液及其有效单体对RSV融合病变的干预作用。
　　 方法：
　　 本研究运用实验动物学、血清药理学、细胞培养、ABC-ELISA、RT-PCR、质粒转染等生物学技术和方法进行体内外实验。实验数据采用SPSS10.0软件进行数理学统计分析。
　　 结果：
　　 1．RSV模型鼠的肺组织中TNF-αmRNA、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA表达的水平均显著高于正常组(P＜0.01)。
　　 2．与空白模型组相比，预先给药、高、中剂量组的支气管肺泡及小肠灌洗液中的SIgA水平均显著高于模型组（P＜0.01）：预先给药、中剂量组的肺组织TNF-αmRNA表达明显低于模型组(P＜0.05)，其中预先灌肠组降低显著（P＜0.01）。
　　 3．与利巴韦林组相比，金欣预先给药、高、中剂量组的支气管肺泡中SIgA水平高于利巴韦林组(除中剂量灌胃组P＜0.05外，其余均为P＜0.01)，在小肠灌洗液中SIgA表达水平方面，金欣高剂量组显著高于利巴韦林组（P＜0.01）。预先灌肠给药组的肺组织TNF-αmRNA表达低于利巴韦林组（P＜0.05）。
　　 4．两种给药途径比较：预先给药及高剂量给药时，灌胃组的支气管肺泡中SIgA水平高于灌肠组(P＜0.05)；在小肠灌洗液中SIgA方面，预先给药时，灌胃组高于灌肠组(P＜0.05)，而高剂量给药时，灌胃组则低于灌肠组(P＜0.05)。预先灌肠组的肺组织TNF-αmRNA表达明显低于高、中、低剂量灌胃组(P＜0.05)
　　 5．A549感染RSV后，在给药干预12h、24h、48h三时间点，与正常组相比，空白模型组的促炎因子TNF-α的mRNA表达水平呈持续升高趋势，有统计学差异；空白血清组、金欣口服液含药血清组、利巴韦林含药血清组三组波动幅度较小，与正常组相比差异无统计学意义；大黄素组、黄芩甙组、大黄素+黄芩甙组都呈现先升后降态势，而大黄素组的峰值出现在给药干预12h后；黄芩甙组、大黄素+黄芩甙组的峰值出现在给药干预24h后；前后差异显著(P＜0.01)，且与空白模型组相比，亦有统计学意义。
　　 6．激光共聚焦显微镜的观察结果显示，RSV感染模型组细胞表面荧光明显增强，融合病变明显；与模型组相比，大黄素组、大黄素+黄芩甙组的细胞表面荧光明显减少，未见明显细胞融合，但大黄素组细胞凋亡脱落较多；金欣口服液含药血清在对干预受染细胞间的融合病变方面与模型组无明显差异，但正常细胞与受染细胞间的融合病变则比模型组稍减少。空白血清、利巴韦林含药血清、黄芩甙作用后，三组细胞融合病变与模型组无明显差异。
　　 结论：
　　 1．金欣口服液是治疗RSV肺炎的有效方剂，可以通过下调肺组织炎症因子TNF-αmRNA的表达，增加呼吸道黏膜SIgA的含量，减轻局部炎症，增强机体局部免疫抵御病毒的功能，发挥其抗RSV作用。
　　 2．保留灌肠是治疗小儿RSV感染有效给药途径之一，值得进一步深入研究和推广。
　　 3．大黄素、黄芩甙能上调RSV感染细胞TNF-α的mRNA的表达，其中大黄素不但能促进感染细胞凋亡，还可能存在干预RSV融合病变的作用。