升丹制剂——五五丹外用对大鼠的肾毒性及毒性机制研究

摘要

目的：基于中医理论，在前期研究的基础上，根据临床用药模式，考察五五丹的毒性及其毒性机制，为临床的安全用药提供科学依据，进而构建符合中医临床特色的安全性评价模式。
　　 方法：通过对破损皮肤模型大鼠连续给予五五丹4周及停药1周的毒性特征研究以及TUNEL法、免疫组织化学法等研究五五丹对肾脏细胞凋亡的影响，并进一步检测细胞凋亡过程中Bax/Bcl-2、信号转导(NF-κB)等相关蛋白表达变化以揭示其作用机理，为临床安全用药提供安全依据。
　　 结果：五五丹高、中、低剂量组在给药第7、21、28天时均引起大鼠肾脏系数显著增加(*p＜0.05，**p＜0.01)。五五丹高剂量组在给药第7、28天时均引起大鼠胸腺系数显著下降(**p＜0.01)。五五丹高剂量组在给药第14天时引起大鼠谷丙转氨酶(*p＜0.05)及谷草转氨酶(**p＜0.01)水平明显升高。五五丹高剂量组在给药第28天时引起大鼠尿素氮(**p＜0.01)水平明显升高。
　　 五五丹大剂量应用后大鼠肾脏主要表现为肾小管腔明显扩张，上皮细胞明显变性、坏死，多数大鼠肾小球无明显改变。高剂量对肾脏的毒性作用1-2周时最明显，以后随着用药时间的延长，毒性作用反而有所减轻。4周时肾脏的病变最轻，在恢复期出现修复性改变（肾小管再生）。对卵巢、子宫有一定的毒性作用，对睾丸生精有抑制作用。高剂量1周时引起皮质部胸腺细胞坏死，2周～4周胸腺有轻度～中度萎缩，恢复期病变明显减轻、胸腺的组织形态学结构基本恢复正常。五五丹高剂量对肾脏组织的凋亡诱导作用1-2周时最明显，以后随着用药时间的延长，毒性作用减轻。五五丹在用药4周，停药恢复1周后，肾脏组织的凋亡程度明显减轻。
　　 五五丹外用1-2周时即可引起Bax表达水平显著性升高，同时Bcl-2表达水平明显下降（*p＜0.05或**p＜0.01），以后随着用药时间的延长，其对Bax及Bcl-2蛋白表达的影响明显减弱。
　　 五五丹外用1-2周时即可引起NF-κB表达水平显著性升高(*p＜0.01),3-4周时仍处于较高水平,5周时NF-κB表达水平明显下降。
　　 结论：1．五五丹大剂量应用对大鼠脏器有明显的毒性表现。肾脏发生损害的形态学改变，主要表现为肾小管改变而多数大鼠肾小球无明显改变。肝脏的功能虽受到损害，但肝脏的病理组织学改变却不显著。卵巢、子宫、睾丸、胸腺等器官有不同程度毒性损害。
　　 2．五五丹对肾毒性与用药剂量呈正相关关系，即用药剂量的加大，对肾脏的毒性作用增加；五五丹对肾毒性与用药时间呈一定的相关关系，高剂量对肾脏的毒性作用1-2周时最明显，中剂量和低剂量2周时达高峰，此后减轻。五五丹在用药4周，停药恢复1周后，肾脏的病变程度明显减轻，提示在本研究所使用的剂量和时间范围内肾功能可以恢复。
　　 3．五五丹引起的肾脏组织凋亡与用药剂量和时间有密切关系，1-2周时最明显，此后减轻。用药4周，停药恢复1周后，肾脏组织的凋亡程度明显减轻，提示在所使用的剂量和时间范围内具有一定的可逆性。
　　 4．五五丹可通过调控Bax/Bcl-2凋亡相关蛋白表达水平引起肾脏细胞凋亡，效应具有一定的剂量效应及时间效应关系，2～3周时达高峰，具有一定的可逆性。提示机体对五五丹具有一定的适应能力，可通过调节其相关代谢或增强其损伤修复功能从而使其毒性降低。
　　 5．NF-κB参与五五丹诱导的大鼠肾脏细胞凋亡，五五丹可通过调控NF-κB凋亡相关蛋白表达水平引起肾脏细胞凋亡。毒性大，则NF-κB表达水平显著性升高。用药时间延长，对NF-κB蛋白表达的影响明显减弱。
　　 6．推断升丹制剂的应用以不超过4周为宜。五五丹外用控制在实验的中等剂量以内，可以避免或减轻毒副作用，实验剂量的五五丹没有出现汞吸收和蓄积的中毒致死，未损害机体修复机制，推荐剂量相对安全。
　　 7．五五丹的毒性研究意义重大。为研究毒性药物制剂对机体组织细胞凋亡的影响，构建有毒中药的安全性评价模式，提供科学研究思路。为临床规范、安全应用疗效卓著的传统药物提供依据，也为中药制剂的开发提供条件。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1.对五五丹的认识

2.对外用升丹的认识

2.1 历史沿革

2.2 升丹名考

2.3 升丹的原料与制备

2.4 中医对升丹应用的认识

2.5 现代对升丹的认识

3.对熟石膏的认识

3.1 祖国医学对煅石膏的认识

3.2 现代对煅石膏研究

3.3 石膏的不良反应和注意事项

4.中医对祛腐生肌法的认识

第二部分 实验研究

1.实验材料

1.1 动物

1.2 药物

1.3 药物配制、剂量及分组

1.4 试剂

1.5 仪器

2.试验方法

2.1 实验方案

2.2 数据处理

3.实验结果

3.1 五五丹大剂量外用对大鼠一般情况的影响

3.2 五五丹大剂量外用对大鼠脏器系数的影响

3.3 五五丹大剂量外用对大鼠血清生化指标的影响

3.4 五五丹大剂量外用对大鼠排尿以及血汞、尿汞水平的影响

3.5 五五丹对大鼠肾脏毒性研究的病理检查结果（附图2）

3.6 五五丹对大鼠卵巢、子宫、睾丸毒性研究的病理学检查结果

3.7 五五丹对大鼠肝脏、胸腺、皮肤毒性研究病理学检查结果

3.8 五五丹对大鼠肾脏组织细胞凋亡检测结果（附图3）

3.9 五五丹对大鼠肾脏组织Bax与Bc1-2蛋白表达的影响（附图4、附图5）

3.10 五五丹对大鼠肾毒性NF-κ B免疫组化研究结果（附图6）

4.讨论

第三部分 结论与展望

结论：

展望：

参考文献

附录

附录一：

附录二：升丹检测报告

附录三：综述

攻读博士学位期间取得的研究成果

致谢

作者简介