人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂不同序贯治疗方案对人肝癌细胞株效应的研究

摘要

目的：通过体外实验观察人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药、同时及序贯作用于人肝癌细胞株SMMC-7721的效果，并探讨其在细胞增殖及周期方面的相关机制，为中药与化疗及分子靶向治疗的序贯应用提供理论依据。
　　 方法：将一定浓度的人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药、同时及序贯作用于人肝癌细胞株SMMC-7721，使用不同的实验方法观察细胞株的生长情况：(1)MTT法观察药物对细胞增殖的影响；(2)流式细胞术检测细胞周期分布及早期凋亡；(3)免疫荧光法检测细胞增殖相关蛋白PCNA的表达；(4)Westernblot法检测细胞周期相关蛋白cyclinD1的表达。
　　 结果：(1)MTT法观察人肝癌SMMC-7721细胞经人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单独、同时及序贯给药后均出现细胞增殖的抑制作用。人参皂苷Rg3、奥沙利铂同时应用组的协同抑制作用较人参皂苷序贯奥沙利铂组明显增高（P＜0.05），但与奥沙利铂序贯人参皂苷组相比未见明显差异(P＞0.05)；奥沙利铂先用组的效果较人参皂苷先用组好(P＜0.05)。人参皂苷Rg3、索拉非尼同时应用组的效果较索拉非尼先用组好(P＜0.05)，表现为相加作用，但与人参皂苷先用组相比无显著性差异(P＞0.05)，索拉非尼先用组表现为拮抗作用。索拉非尼、奥沙利铂同时应用组抑制率最高，表现为协同作用，奥沙利铂先用组较索拉非尼先用组效果好(P＜0.05)。(2)流式细胞术检测人参皂苷Rg3阻滞细胞于G0/G1期，索拉非尼阻滞细胞于S期，奥沙利铂则阻滞在S期、G2/M期。人参皂苷Rg3、奥沙利铂同时应用组和奥沙利铂先用组凋亡率相似，阻滞细胞于G2/M期，且凋亡率均较人参皂苷先用组高。先用索拉非尼后序贯人参皂苷Rg3凋亡率最高，为39.0％，细胞被阻滞在G0/G1期、G2/M期，凋亡程度优于同时应用组及人参皂苷先用组。索拉非尼、奥沙利铂同时应用组凋亡率最高，为67.9%，细胞被阻滞在S期，先用奥沙利铂后序贯索拉非尼较先用索拉非尼后序贯奥沙利铂凋亡率高。(3)免疫荧光法检测人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂按不同顺序作用于SMMC-7721细胞后，序贯组及同时组的PCNA蛋白表达均较单药组下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)。人参皂苷Rg3、奥沙利铂同时应用组PCNA表达的下降程度与奥沙利铂先用组相似(P＞0.05)，均比人参皂苷先用组下降明显(P＜0.05)。人参皂苷Rg3、索拉非尼同时应用组较索拉非尼先用组的PCNA表达明显减弱(P＜0.05)，与人参皂苷先用组的蛋白表达下降程度相似(P＞0.05)，序贯组之间无显著性差异(P＞0.05)。索拉非尼、奥沙利铂同时应用组PCNA表达的下降程度与奥沙利铂先用组相似(P＞0.05)，均较索拉非尼先用组下降明显(P＜0.05)。(4)Westernblot法检测人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂不同给药顺序作用于SMMC-7721细胞，序贯组及同时组的cyclinD1蛋白表达均较单药组下降。先用奥沙利铂后序贯人参皂苷较先用人参皂苷后序贯奥沙利铂cyclinD1表达下降明显。人参皂苷Rg3、索拉非尼同时应用组较索拉非尼先用组的cyclinD1表达明显减弱，与人参皂苷先用组的蛋白表达下降程度相似。索拉非尼、奥沙利铂同时应用组cyclinD1表达的下降程度与奥沙利铂先用组相似，均较索拉非尼先用组下降明显。
　　 结论：(1)人参皂苷Rg3、奥沙利铂序贯及同时应用较单药具有明显的抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用，先用奥沙利铂后序贯人参皂苷与两药同时应用协同效果相似，且都比先用人参皂苷后序贯奥沙利铂效果好，其机制可能是由于奥沙利铂先用组及同用组将细胞阻滞在S期、G2/M期，增加促凋亡作用，同时下调PCNA、cyclinD1蛋白的表达。(2)人参皂苷Rg3、索拉非尼序贯及同时应用较单药抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的效果好，先用人参皂苷Rg3后序贯索拉非尼与两药同时应用表现出相似的相加作用，先用索拉非尼后序贯人参皂苷Rg3则表现为拮抗作用，机制可能与PCNA、cyclinD1蛋白表达的下降有关。(3)索拉非尼、奥沙利铂序贯及同时应用较单药具有明显的抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用，两药同时应用比序贯应用效果好，表现为协同作用，先用奥沙利铂后序贯索拉非尼较而先用索拉非尼后序贯奥沙利铂效果好，索拉非尼先用组表现为拮抗作用，这种现象可能与两种药物作用于不同的细胞周期而产生不同的阻滞效应有关，与PCNA、cyclinD1蛋白的表达没有特异性关系。

目录

声明

前言

第一部分 药物序贯治疗在恶性肿瘤中的研究进展

1.治疗乳腺癌

1.1 蒽环类和非蒽环类治疗方案的序贯化疗

1.2 蒽环类和紫杉类治疗方案的序贯化疗

1.3 蒽环类与紫杉类及非蒽环类治疗方案的序贯化疗

1.4 分子靶向药物与化疗方案的序贯治疗

2.治疗肺癌

2.1 化疗药物和分子靶向药物的序贯治疗

2.2 中药制剂和分子靶向药物的序贯治疗

3.治疗肝癌

4.治疗其他肿瘤

5.小结

第二部分 人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂不同序贯方案治疗人类肝癌细胞的实验研究

1.材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学方法

2.结果

2.1 MTT法检测药物不同序贯方式对细胞增殖的影响

2.2 流式细胞仪检测细胞的周期分布及凋亡率

2.3 免疫荧光法观察细胞增殖相关蛋白PCNA的表达

2.4 Western blot法检测细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达

3.讨论

4.结论

5.附图

参考文献

附录

综述

英文缩略名词对照表

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢