常春藤皂苷元抑制TGF-β1诱导人肠癌SW480细胞上皮-间质转化实验研究

摘要

研究目的:
　　常春藤皂苷元属于药用植物威灵仙中的五环三萜类化合物，现已知存在于多种天然植物中。常春藤皂苷元为齐墩果酸的衍生物，关于常春藤皂苷元药理活性抗肿瘤文献研究报道较少，而齐墩果酸的相关研究报道已相当深入，由于两者化学结构部分类似，假定可能存在着相似作用，故本实验旨在探讨常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞株在转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导下的上皮-间质转化的相关影响，从上皮-间质转化的角度进一步阐明常春藤皂苷元抑制肠癌生长及抗侵袭的可能机制，为中医药治疗肿瘤提供新的理论支持。
　　研究方法:
　　1.将SW480细胞株进行如下分组:①空白对照组;②10ng·ml-1TGF-β1诱导组;③呈浓度梯度的常春藤皂苷元药物干预组（5、10、20、40、80μg·ml-1药物与TGF-β1共培养），TGF-β1剂量为10ng·ml-1，体外培养12、24、48小时。MTT检测各组细胞抑制率。
　　2.倒置相差显微镜观察对照组与实验组细胞形态变化。
　　3.Transwell小室侵袭实验检测各分组细胞的侵袭能力变化。
　　4.RT-qPCR法检测各组细胞EMT及侵袭相关基因mRNA表达水平。
　　5.Western Blot法检测各组细胞EMT及侵袭相关蛋白表达情况。
　　研究结果:
　　1.常春藤皂苷元能抑制TGF-β1诱导的肠癌细胞SW480的增殖，且呈量效和时效关系;
　　2.常春藤皂苷元能干预TGF-β1诱导的SW480细胞形态由上皮表型向间质表型转变;
　　3.常春藤皂苷元能抑制TGF-β1诱导的SW480细胞的侵袭转移过程;
　　4.常春藤皂苷元作用于TGF-β1诱导的SW480细胞后，EMT及侵袭相关基因N-cadherin、Vimentin、Snail、STAT3、MMP-9、MMP-14表达量减弱，E-cadherin、RECK的表达量则增强;
　　5.常春藤皂苷元作用于TGF-β1诱导的SW480细胞后，EMT及侵袭相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Snail、STAT3、MMP-9、MMP-14表达水平降低，E-cadherin、RECK的表达水平反而增高;
　　研究结论:
　　常春藤皂苷元对人肠癌细胞SW480增殖及侵袭转移能力具有抑制作用。其机制可能是影响E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、STAT3、MMP-9、MMP-14、RECK的表达，引起SW480细胞发生EMT逆转，进而抑制SW480细胞的增殖及侵袭。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1．中医对肠癌的认识

1．1 肠癌的病因病机

1．2 中医治疗肠癌现状

2．EMT与TGF-β

2．1 EMT概述及发生机制

2．2 TGF-β介导EMT与肿瘤侵袭转移的研究

2．3 TGF-β与肠癌细胞EMT的关系

3 常春藤皂苷元的选择及相关研究

3．1 常春藤皂苷元的选择

3．2 常春藤皂苷元抗肿瘤相关研究

第二部分 实验研究

1．实验材料

1．1 实验细胞株

1．2 实验试剂

1．3 主要仪器设备

1．4 主要试剂及药物的配制

2 实验方法与步骤

2．1 四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验方法

2．2 倒置相差显微镜记录细胞形态差异

2．3 Transwell实验检测常春藤皂苷元干预SW480后的侵袭能力变化

2．4 RT-qPCR实验检测EMT及侵袭相关基因表达的变化

2．5 Western Blot实验检测EMT及侵袭相关蛋白表达的变化

2．6 统计学分析

3 实验结果

3．1 SW480细胞经常舂藤皂苷元干预后增殖能力变化

3．2 倒置显微镜观察细胞形态

3．2 Transwell实验检测常春藤皂苷元干预SW480后的侵袭能力变化

3．3 RT-qPCR实验检测EMT及侵袭相关基因表达的变化

3．4 Western Blot实验检测EMT及侵袭相关蛋白表达的变化

第三部分 讨论

1 中药干预EMT相关机制

1．1 中药干预EMT过程中的相关因子

1．2 中药干预EMT相关的信号转导途径

2 肿瘤细胞侵袭转移与RECK、MMPs的关系

3 实验结果分析

3．1 MTT结果分析

3．2 倒置显微镜结果分析

3．3 Transwell实验结果分析

3．4 RT-qPCR实验结果分析

3．5 Western Blot实验结果分析

结语

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢