甲状旁腺激素相关肽在促进骨折愈合中的作用和机制研究

摘要

目的:明确内源性PTHrP缺乏和外源性PTHrP给药对骨折愈合的影响，探讨PTHrP在骨折愈合过程中的作用和机制。
　　方法:24只8周龄同窝野生型(wild type，WT)和PTHrP杂合子（PTHrP+/-）小鼠建立标准化股骨中段骨干骨折模型，随机分为四组:WT对照组、PTHrP+/-对照组、WT治疗组和PTHrP+/-治疗组，每组6只。治疗组每天给予PTHrP1-86（80μg·kg-1·d-1，ih.），对照组给予等量的生理盐水。2周后取小鼠股骨进行X线摄影和Micro-CT扫描，对骨痂组织进行影像学研究分析;通过组织学染色、组织化学染色、免疫组织化学染色对骨痂内成骨细胞进行研究分析;实时荧光RT-PCR检测成骨细胞相关基因表达水平;Western blot检测成骨细胞相关蛋白表达水平。
　　结果:与WT对照组相比，生理盐水处理PTHrP+/-小鼠的总骨痂与骨性骨痂体积明显减少(P＜0.05)，骨痂组织单位面积内成骨细胞数目减少(P＜0.05)，Ⅰ型胶原阳性面积降低(P＜0.05)，骨钙素(Osteocalcin，OCN)、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、核心结合因子α1抗体(runt-related transcription factor2，RUNX2)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ，COL-1)的基因表达水平下调(P＜0.05)，同时，Runx2和IGF-1的蛋白表达水平也下调(P＜0.05)。治疗组的小鼠较相同基因型对照组小鼠，骨性骨痂明显增加，单位面积内成骨细胞数目增多，Ⅰ型胶原阳性面积升高，成骨细胞相关的基因和蛋白表达水平均上调。
　　结论:内源性PTHrP缺失会导致骨折愈合的延迟，外源性PTHrP给药可以纠正这一现象，并促进正常小鼠的骨折愈合。PTHrP可以通过促进成骨细胞的增殖和活化加速骨痂的形成和软骨骨痂向骨性骨痂转化，从而促进骨折愈合。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 中医学认识

1．1 中医药对骨折愈合治疗原则

1．2 中医药在治疗骨折愈合中作用和机制

2 PTHrP与骨形成的基础研究

第二部分 实验研究

1 材料与方法

1．1 实验动物

1．2 主要试剂与耗材

1．3 主要仪器

1．4 基因型鉴定

1．5 小鼠骨折模型制备

1．6 X线和Micro-CT

1．7 固定脱钙

1．8 石蜡切片的制备

1．9 HE染色试验

1．10 总胶原组织化学染色

1．11 蛋白印迹(Western blot)试验

1．12 RT-PCR实验

1．13 实时荧光定量RT-PCR实验

1．14 免疫组织化学染色

1．15 电脑软件分析统计及统计学符号的标识

2 实验结果

2．1 内源性PTHrP缺失和外源性PTHrP给药对于骨折愈合的影响

2．2 内源性PTHrP缺失和外源性PTHrP给药对于骨痂形成的影响

2．3 内源性PTHrP缺失和外源性PTHrP给药对于成骨细胞骨形成的影响

2．4 内源性PTHrP缺失和外源性PTHrP给药对于成骨细胞相关基因表达水平的影响

2．5 内源性PTHrP缺失和外源性PTHrP给药对于成骨细胞相关蛋白表达水平的影响

3 讨论

参考文献

文献综述 甲状旁腺激素和甲状旁腺激素相关肽对骨形成作用的研究进展

英文缩略词表

攻读硕士期间取得的学术成果

致谢