“补肾活血方”对绝经后骨质疏松症影响的实验研究

摘要

目的:
　　研究江苏省中医院骨伤科经验方“补肾活血方”对绝经后骨质疏松症的疗效机制。
　　方法:
　　分别基于“补肾活血”方药治疗骨质疏松症随机对照临床试验文献的系统评价和Meta分析;“补肾活血方”对去卵巢骨质疏松症大鼠模型“高转换型”骨代谢失衡的调控作用;“补肾活血方”含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化能力的干预作用三个方面，探索“补肾活血”治疗绝经后骨质疏松症的疗效机制。①文献系统评价和Meta分析:关键词检索（补肾、补肝肾、活血、健脾活血、骨质疏松症、临床试验、临床研究），检索数据库为维普、万方、中国知网，纳入2000年01月-2016年9月时间区间内以补肾活血为法则的方药治疗骨质疏松症的随机对照临床试验。应用Review Manager5.3软件进行Meta分析，所选用主要结局指标为:主观症状改善、骨密度改变、腰背痛VAS评分改善。通过Meta分析数据说明“补肾活血”方药治疗骨质疏松症确有临床疗效;并基于Jadad文献质量评分体系，分析临床研究存在的不足。②“补肾活血方”对造模大鼠“高转换型”骨代谢失衡的调控作用:设立四组动物（空白对照组、模型对照组、治疗组、假治疗组），每组25只。造模方法为人工手术去除大鼠双侧卵巢制作骨质疏松症动物模型，治疗组造模2周后开始给药（补肾活血汤浓缩液灌胃），假治疗组给予生理盐水灌胃。分别于4周、8周、12周每组取5只大鼠经中心静脉取血检测骨代谢相关指标:抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)、Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅰ型胶原N末端肽(NTX);第12周中心静脉取血后麻醉各组大鼠，检测L2-L6椎体骨密度和骨矿含量。③“补肾活血方”含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化能力的干预作用:取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养，构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高三种浓度的补肾活血方含药血清;采用MTT法、细胞上清液碱性磷酸酶测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。
　　结果:
　　①文献系统评价和Meta分析:结果显示“补肾活血”方药治疗骨质疏松症在主观症状改善、骨密度提高、疼痛VAS评分改善较对照治疗存在优效性，但此类临床研究的随机化方案设计、盲法实施等科研方案设计方面存在不规范性，需要后续更严谨的大样本、多中心、随机对照临床试验证据的进一步支持。
　　②动物实验:造模后4W模型对照组、治疗组、假治疗组大鼠血清BALP、CTX、NTX和TRACP含量显著高于空白对照组;造模后8周和12周，模型对照组、假治疗组上述指标的增高趋势仍然维持，而治疗组则在第8周和12周出现较模型对照组和假治疗组下降的趋势。模型对照组、治疗组、假治疗组大鼠血清PⅠCP和PⅠNP水平则在造模后4周较空白对照组显著下降，造模后8周和12周模型对照组和假治疗组的PⅠCP和PⅠNP水平仍然呈下降趋势，而治疗组大鼠的血清PⅠCP和PⅠNP水平则在造模后第8W即出现回升，造模后12W也保持了增高的趋势，但含量较空白对照组仍较低。
　　③细胞实验:加入含药血清干预细胞生长48h后，MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象，并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后，低、中、高三个剂量组ALP活性增高，高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。
　　结论:
　　江苏省中医院骨伤科经验方“补肾活血方”对绝经后骨质疏松症的疗效与以下作用机制有关:①对绝经后骨质疏松症“高转换型”骨代谢失衡紊乱的调节，即对异常增高的骨转换速率起到了抑制性作用;②有提高人成骨细胞内ALP活性和促进成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。

目录

声明

摘要

英文缩略词

前言

第一章 现代医学与中医学对绝经后骨质疏松症的认识

第一节：现代医学对绝经后骨质疏松症的认识

1．绝经后骨质疏松症的定义和流行病学

2．绝经后骨质疏松症发病机制的研究进展

3．绝经后骨质疏松症防治领域的研究现状

第二节：中医学对绝经后骨质疏松症的认识

1．对绝经后骨质疏松症中医病名的认识

2．绝经后骨质疏松症发病机制的中医药研究进展

3．绝经后骨质疏松症防治的中医药研究现状

第二章 “补肾活血”方药治疗骨质疏松症RCT临床试验的系统评价与Meta分析

1．材料与方法

2．结果

3．基于Meta分析结果，“补肾活血”方药治疗骨质疏松症研究的优势与不足

第三章 补肾活血方对绝经后骨质疏松症影响的实验研究

第一节：补肾活血方对去卵巢大鼠骨质疏松症模型的骨代谢影响

1 材料和方法

2．结果

第二节：补肾活血方对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

1．材料和方法

2．结果

第四章 讨论

第一节：绝经后骨质疏松症动物模型的选择

1．骨质疏松症动物模型的造模方法分类

2．手术造模方法的发展、成熟及其优势

3．检测绝经后骨质疏松症动物模型造模成功与否的评价标准

第二节：反映骨代谢的生化指标在绝经后骨质疏松症诊疗中的应用价值

1．骨代谢相关的生化指标概述

2．反映骨形成的生化指标

3．反映骨吸收的生化指标

第三节：补肾活血方对骨代谢的干预效应

1．补肾活血方的理法方药

2．补肾活血方对PMOP大鼠骨代谢的影响，及其对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

第五章 结论与展望

参考文献

攻读博士学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历