艾迪注射液治疗原发性肝癌的Meta分析及作用机制研究

摘要

目的:1.利用循证医学方法评价艾迪注射液治疗原发性肝癌的临床有效性和安全性，为临床实践提供可靠依据。2.利用现代药理、分子生物学研究手段探讨艾迪注射液治疗原发性肝癌的确切作用机制，为临床使用提供科学依据。
　　方法:1.通过检索中国生物医学文献数据库(Chinese biomedicine database，CBM)、中国知网（China National Knowledge Internet，CNKI）、维普数据库(VIP)、万方数据库（Wanfang）、PubMed、Cochrane Library、 Embase（Excerpta Medica Database），获取各数据库中建库至2016年10月与艾迪注射液治疗原发性肝癌相关的随机对照试验文献。使用NoteExpress文献管理软件对检获文献剔除重复，并结合纳入、排除标准进行筛选。最后对符合纳入要求的文献运用Cochrane偏倚风险评估工具评价纳入研究的方法学质量，利用Revman软件做统计学分析。
　　2.使用倒置显微镜观察艾迪注射液对肝癌细胞形态的影响，MTT法检测其抑制率。Hoechst33342/PI双染荧光显微镜检测HepG-2细胞凋亡，FITC-Annexin V/PI双染流式细胞仪测定凋亡率。Western Blot法检测艾迪注射液诱导HepG-2凋亡相关蛋白及MAPK信号通路蛋白表达量的变化，Real-Time PCR检测相关基因表达变化。
　　结果:1.本研究共纳入了72个随机对照试验(Randomized Controlled Trial，RCT)，共纳入5096例受试者。
　　2.纳入的研究中，15个研究报告了6个月生存期，17个研究报告了12个月生存期，3个研究报告了18个月生存期，16个研究报告了24个月生存期，4个研究报告了36个月生存期。
　　3.6个月生存率分析显示:3.1艾迪注射液联合肝动脉栓塞化疗(Transcatheter ArterialChemoembolization，TACE) VS TACE，纳入了11个研究，共880例受试者，结果提示艾迪注射液能提高6个月生存率（RR=1.24，95％CI[1.08，1.41]，P=0.0002）。3.2艾迪注射液联合对症支持治疗VS对症支持治疗共纳入2个研究，共96例受试者，结果提示艾迪注射液能提高6个月生存率（RR=2.33，95％CI[1.49，3.67]，P=0.0002）。
　　4.12个月生存率显示:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共纳入了15个研究，共1323例受试者，结果提示艾迪注射液能提高12个月生存率(RR=1.36，95％CI[1.24，1.50]，P＜0.00001)。
　　5.18个月生存率显示:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共3个研究，178例受试者，结果提示艾迪注射液能提高18个月生存率（RR=2.00，95％CI[1.26，3.20]，P=0.004）。
　　6.24个月生存率显示:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共纳入了14个研究，1258例受试者，结果提示艾迪注射液能提高24个月生存率(RR=1.50，95％CI[1.28，1.75]，P＜0.00001)。
　　7.36个月生存率显示:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共纳入4个研究，415例受试者，结果提示艾迪注射液能提高36个月生存率(RR=1.73，95％CI[1.27，2.35]，P=0.0005)。
　　8.近期疗效，有59个研究报告了临床有效率，53个研究报告了临床获益率。
　　9.临床有效率显示:9.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共38个研究，2789例受试者，采用WHO(World Health Organization)实体瘤疗效评价标准的有31个研究，共2289例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床有效率(RR=1.35，95％CI[1.25，1.46]，P＜0.00001);采用RECIST（Response Evaluation Criteria In Solid Tumors）实体瘤疗效评价标准的有7个研究，共纳入450例受试者能提高临床有效率(RR=1.34，95％CI[1.13，1.59]，P=0.0007)。9.2艾迪注射液联合对症支持治疗VS对症支持治疗，纳入了5个研究，292例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床有效率(RR=3.49，95％CI[1.34，9.08]，P=0.01)。9.3艾迪注射液联合化疗VS化疗，共纳入10个研究，832例受试者，采用WHO实体瘤疗效评价标准的有9个研究，共纳入676例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床有效率（RR=1.43，95％CI[1.20，1.70]，P＜0.0001），有1个研究采用了RECIST标准，纳入了156例受试者，结果提示干预组的有效率高于对照组(P＜0.05)。9.4艾迪注射液联合消融治疗VS消融治疗，共3个研究，179例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床有效率(RR=1.29,95％CI[1.04,1.61],P=0.02)。
　　10.临床获益率显示:10.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共34个研究，2464例受试者。采用WHO实体瘤疗效评价标准的有28个研究，共2094例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床获益率(RR=1.26，95％CI[1.20，1.32]，P＜0.00001)。采用RECIST实体瘤疗效评价标准的有6个研究，共纳入370例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床获益率（RR=1.24，95％CI[1.11，1.39]，P=0.0001）。10.2艾迪注射液联合对症支持治疗VS对症支持治疗，有6个研究，共纳入352例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床获益率（RR=1.81，95％CI[1.19，2.76]，P=0.005）。10.3艾迪注射液联合化疗VS化疗，共9个研究，762例受试者，采用WHO标准的有8个研究，606例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床获益率（RR=1.38，95％CI[1.09，1.47]，P=0.0002）;有1个研究采用了RECIST标准，纳入了156例受试者，干预组的获益率高于对照组(P＜0.05)。10.4艾迪注射液联合消融治疗VS消融治疗，共3个研究，179例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床获益率(RR=1.19，95％CI[1.03，1.39]，P=0.02)。
　　11.生活质量改善率:11.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共24个研究，1696例受试者，结果提示艾迪注射液能提高生活质量改善率(RR=1.84，95％CI[1.64，2.06]，P＜0.00001)。11.2艾迪注射液联合对症支持治疗VS对症支持治疗，共6个研究，352例受试者，结果提示艾迪注射液能提高生活质量改善率(RR=2.98，95％CI[1.96，4.53]，P＜0.00001)。11.3艾迪注射液联合化疗VS化疗，共8个研究，507例受试者，结果提示艾迪注射液能提高生活质量改善率(RR=1.76，95％CI[1.40，2.21]，P＜0.00001)。11.4艾迪注射液联合放疗VS放疗，共3个研究，190例受试者，结果提示艾迪注射液能提高生活质量改善率(RR=2.12，95％CI[1.52，2.96]，P＜0.0001)。
　　12.临床症状改善率:12.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共6个研究，370例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床症状改善率（RR=1.52，95％CI[1.23，1.89]，P=0.0001）。12.2艾迪注射液联合化疗VS化疗，共3个研究，190例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床症状改善率（RR=1.57，95％CI[1.22，2.01]，P=0.0004）。12.3艾迪注射液联合放疗VS放疗，共3个研究，190例受试者，结果提示艾迪注射液能提高临床症状改善率(RR=1.83,95％CI[1.42,2.34], P＜0.00001)。
　　13.中医症状改善率:共3个研究，172例受试者，结果提示艾迪注射液能提高中医症状改善率（RR=1.41，95％CI[1.17，1.69]，P=0.0002）。
　　14.CD3+T细胞:14.1艾迪注射液联合TACE VS TACE:共8个研究，纳入584例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD3+T细胞水平(MD=11.26，95％CI[7.26，15.26]，P＜0.00001)。14.2艾迪注射液联合化疗VS化疗，共3个研究，纳入148例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD3+T细胞水平(MD=5.81，95％CI[4.44，7.17]，P＜0.00001)。14.3艾迪注射液联合消融治疗VS消融治疗，共2个研究，111例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD3+水平（MD=6.37，95％CI[4.00，8.73]，P＜0.00001）。
　　15.CD4+T细胞:15.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共8个研究，584例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD4+T细胞水平（MD=9.52，95％CI[5.76，13.29]，P＜0.00001）。15.2艾迪注射液联合化疗VS化疗，共3个研究，148例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD4+T细胞水平（MD=6.74，95％CI[3.29，10.19]，P=0.0001）。15.3艾迪注射液联合消融治疗VS消融治疗，共4个研究，246例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD4+T细胞水平（MD=2.89，95％CI[1.42，4.37]，P=0.0001）。
　　16.CD4+/CD8+:16.1艾迪注射液联合TACE VS TACE:共7个研究，纳入541例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD4+/CD8+水平(MD=0.40，95％CI[0.25，0.55]，P＜0.00001);16.2艾迪注射液联合消融治疗VS消融治疗:共4个研究，246例受试者，结果提示艾迪注射液能提高CD4+/CD8+水平（MD=0.30，95％CI[0.23，0.37]，P＜0.00001）。
　　17.NK细胞:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共4个研究，纳入271例受试者，结果提示艾迪注射液能提高NK水平(MD=7.49，95％CI[6.64，8.34]，P＜0.00001)。
　　18.AFP下降率:18.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共8个研究，545例受试者，结果提示艾迪注射液能提高AFP下降率(RR=1.49，95％CI[1.24，1.79]，P＜0.0001)。18.2艾迪注射液联合化疗VS化疗，共2个研究，175例受试者，结果提示艾迪注射液能提高AFP下降率(RR=2.55,95％CI[1.49,4.38], P=0.0007)。
　　19.白细胞降低发生率:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共17个研究，1341例受试者，结果提示艾迪注射液能降低白细胞降低发生率(RR=0.67，95％CI[0.56，0.81]，P＜0.0001)。
　　20.血小板降低发生率:艾迪注射液联合TACE VS TACE，共5个研究，349例受试者，结果提示艾迪注射液能降低血小板降低发生率(RR=0.50，95％CI[0.40，0.61]，P＜0.00001)。
　　21.胃肠道反应发生率:21.1艾迪注射液联合TACE VS TACE，共10个研究，721例受试者，结果提示艾迪注射液能降低胃肠道反应发生率(RR=0.66，95％CI[0.51，0.85]，P=0.001)。21.2艾迪注射液联合化疗VS化疗，共7个研究，463例受试者，结果提示艾迪注射液能降低胃肠道反应发生率（RR=0.61，95％CI[0.45，0.84]，P=0.002）。
　　22.肝功能损害发生率:共7个研究，455例受试者，结果提示艾迪注射液能降低肝功能损害发生率（RR=0.51，95％CI[0.40，0.64]，P＜0.00001）。
　　23.肾功能损害发生率:共5个研究，270例受试者，结果提示艾迪注射液能降低肾功能损害发生率（RR=0.18，95％CI[0.05，0.68]，P=0.01）。
　　24.光学倒置显微镜下观察不同浓度艾迪注射液对肝癌细胞形态的影响:对照组的肝癌细胞形态呈梭形，细胞伸展，贴壁良好，密集型生长。不同浓度艾迪注射液给药后，细胞呈现不规则形态，细胞膜皱缩，细胞质浓缩，细胞间距变大，随着给药浓度的增加，上述现象愈加明显，并有部分细胞不贴壁，悬浮于培养基中。
　　25.MTT法检测艾迪注射液作用下HepG-2、SMMC-7721细胞凋亡率:24h对HepG-2的抑制率分别为3.75mg/mL22.72％，7.5mg/mL25.42％，15mg/mL34.05％，30mg/mL43.20％，60mg/mL51.88％，120mg/mL60.46％。对SMMC-7721的抑制率分别为3.75mg/mL3.87％，7.5mg/mL9.04％,15mg/mL6.36％,30mg/mL8.98％,60mg/mL28.39％,120mg/mL41.71％。48h对HepG-2的抑制率分别为3.75mg/mL5.3％，7.5mg/mL13.03％，15mg/mL17.45％，30mg/mL25.79％，60mg/mL53.95％，120mg/mL75.95％。对SMMC-7721的抑制率分别为3.75mg/mL9.24％,7.5mg/mL10.32％,15mg/mL10.33％,30mg/mL20.65％,60mg/mL29.98％,120mg/mL60.64％。
　　26.Hoechst33342/PI检测HepG-2细胞凋亡:空白对照组HepG-2细胞可被Hoechst染色，且Hoechst着色为弱蓝色，形态呈圆形。低、中剂量艾迪注射液给药组的HepG-2细胞，Hoechst染色为强蓝色，且中剂量有部分细胞被PI染成红色。高剂量艾迪注射液给药组的HepG-2细胞，Hoechst染色呈强蓝色，呈分叶状，且较多细胞被PI染成红色。
　　27.FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡:空白对照组细胞的总凋亡率为6.87±0.95％，在给药24h后，低、中、高剂量艾迪注射液给药组细胞的总凋亡率分别为29.43±7.07％、42.03±5.31％、63.80±3.38％，总凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　28.Western Blot检测结果提示:能够提高磷酸化P38，JNK蛋白的表达，并下调磷酸化ERK1/2蛋白的表达，激活Caspase家族蛋白的活化，提高活化Caspase-3，9蛋白的表达;减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达，上调促凋亡Bak，Bid，Bax蛋白的表达来诱导凋亡。
　　29.Real-Time PCR检测凋亡相关基因表达:能够下调上游MEK1/2的表达来减少ERK1/2基因的表达，并能同时上调P38 MAPK的表达，进而减少Bcl-2的表达，上调Bax的表达来促进凋亡。
　　结论:Meta分析结果显示:①艾迪注射液联合TACE能提高6个月、12个月、18个月、24个月、36个月生存率，提高临床有效率和临床获益率，并能显著改善生活质量，改善临床症状和中医症状，同时还能提高CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞水平、NK细胞水平，增强免疫力。还能降低AFP水平、减少骨髓毒性和胃肠道反应的发生，并能够降低肝、肾功能损害的发生率。②艾迪注射液联合对症支持治疗能通过提高6个月生存率，临床有效率和获益率。同时还能改善生活质量。但纳入研究较少，仍需开展进一步临床研究来证实。③艾迪注射液联合化疗能提高临床有效率和获益率，改善生活质量，改善临床症状，提高CD3+、CD4+T细胞水平，降低AFP水平发挥抗肿瘤作用。并能减少化疗导致的胃肠道反应的发生。④艾迪注射液联合消融治疗能提高临床有效率和获益率，提高CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T细胞水平。⑤艾迪注射液联合放疗能改善生活质量，改善临床症状。但纳入研究数量较少，样本量较小，仍需进一步开展临床试验来验证。
　　药理机制研究表明艾迪注射液能够通过MAPK信号通路，上调P-JNK、P-P38 MAPK、Cleaved-Caspase-3，9、Bak、Bid、Bax的表达，下调P-ERK1/2、Bcl-2的表达来诱导HepG-2细胞凋亡。

目录

声明

摘要

前沿

第一部分 理论研究

1．中医学对肝癌的认识

1．1 传统中医对肝癌的认识

1．2 现代中医对肝癌的认识

2．艾迪注射液治疗肝癌的概况

2．1 循证优选艾迪注射液治疗肝癌的依据

2．2 艾迪注射液治疗肝癌的中医理论依据

2．3 艾迪注射液治疗肝癌的现状

第二部分 循证研究

1．资料和方法

1．1 纳入与排除标准

1．2 文献检索方法

1．3 文献筛选

1．4 资料提取

1．5 证据质量评价标准

1．6 观察指标

1．7 统计分析方法

2．结果

2．1 文献检索及筛选结果

2．2 纳入研究的基本特征

2．3 纳入研究的方法学质量评价

2．4 有效性结局指标

2．5 安全性指标

3．讨论

3．1 纳入研究的特征和质量

3．2 异质性的来源及处理

3．3 TACE中采用相同化疗方案的疗效分析

3．4 艾迪注射液治疗原发性肝癌的中医理论分析

3．5 艾迪注射液治疗肿瘤的药理机制分析

4．结论

第三部分 机制研究

1．艾迪注射液对肝癌细胞生长的影响

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 实验结果

1．4 讨论

1．5 结论

2．艾迪注射液对肝癌细胞株HepG-2凋亡的影响

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 实验结果

2．4 讨论

2．5 结论

3．艾迪注射液诱导肝癌细胞株HepG-2凋亡的机制研究

3．1 实验材料

3．2 实验方法

3．3 实验结果

3．4 讨论

3．5 结论

第四部分 结语与展望

1．结语与创新点

2．展望

参考文献

附录

攻读博士学位期间取得的学术成果

致谢