黄芪--莪术配伍联合奥沙利铂对CT26.WT原位移植瘤小鼠中趋化因子及其受体表达的影响

摘要

目的： 本研究采用手术手段建立Balb/c小鼠结肠癌原位移植瘤模型，探讨中药扶正祛邪药对——黄芪-莪术水提物与奥沙利铂(L-OHP)联合应用抑制鼠结肠癌CT26wild-type(CT26.WT)细胞的转移，并调控CXCR3、CCR6、CXCL9、CCL20在mRNA及蛋白水平的表达。 方法： 1.建立Balb/c小鼠结肠癌原位移植瘤模型，观察各组肿瘤在小鼠体内的生长情况，初步观察小鼠肝脏转移的情况。 2.通过黄芪-莪术分别以高、中、低剂量联合L-OHP对小鼠治疗，观察用药后小鼠体重，瘤体大小，肝脏转移情况的变化。 3.采用Real time-PCR方法分别检测原位移植肿瘤灶与肝转移灶CXCR3、CCR6、CXCL9、CCL20mRNA的表达情况。 4.采用Western Blotting方法分别检测原位移植肿瘤灶与肝转移灶CXCR3、CCR6、CXCL9、CCL20的蛋白表达情况。 结果： 1.成功建立Balb/c小鼠结肠癌原位移植瘤模型，成模率达到100％。 2.L-OHP单独应用和联合中药应用均能抑制原位移植瘤体的增大，阳性药抑制原位移植瘤生长的效果最好(P＜0.01)。联合用药能降低肝转移灶的发生(P＜0.05)。 3.阴性药组及联合用药低剂量组CXCR3及CCR6mRNA的表达显著下调(P＜0.01)。用药组CXCL9、CCL20mRNA表达未见统计学意义。 4.与空白对照组相比，联合用药能不同程度下调CXCR3、CCR6蛋白表达(P＜0.05，P＜0.01)。在肝组织内，联合用药可以下调CXCL9、CCL20蛋白表达(P＜0.01)。 结论： L-OHP联合黄芪-莪术作用于荷瘤小鼠能够显著地抑制原位移植结肠癌的肝转移，降低趋化因子CXCR3、CCR6蛋白与mRNA的表达，低剂量联合效果最显著，具有浓度依赖性。中药联合化疗药抗肿瘤转移机制可能与下调CXCR3、CCR6蛋白与mRNA相关，对CXCL9、CCL20蛋白与mRNA的影响尚待进一步实验证明。CXCR3、CCR6可成为判断结肠癌预后的潜在靶点。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照

前言

第一章理论研究

一、黄芪、莪术单用及配伍，增强抗肿瘤免疫监视并同期抑制癌细胞通过血道、淋巴道转移

1．黄芪抗肿瘤转移及免疫监视作用——以益气固摄之效限制癌细胞于局部，增强免疫使癌不得蔓延

2．莪术抗肿瘤转移及免疫监视作用——以破血行气之功畅血行，纠正癌组织内部缺氧状态，调炎症环境

3．黄芪-莪术抗肿瘤转移及免疫监视作用——两药相使配伍补泻同施，共奏防癌扩散、抑杀肿瘤的功效

二、CXCR3／CXCL9、CCR6／CCL20是连接癌症血道、淋巴道转移、免疫监视的中枢环节

1．中枢指标趋化因子表达对肿瘤免疫监控有复杂的调节作用，高表达使肿瘤呈高转移倾向，可作为患者"邪盛"的判断依据

2．邪气盛，则癌毒扩散，趋化因子异常分泌，可致促进肿瘤进展的结果

3．根据趋化因子在肿瘤病程中的意义，初步构思三种抗肿瘤策略

4．CXCR3及其配体CXCL9，与结肠癌转移及免疫监视关系密切的趋化因子轴

5．CCR6拥有唯一配体CCL20，其表达可诱导免疫细胞向癌灶迁移，扼杀癌毒，并提示肿瘤即将转移

参考文献

第二章实验研究

一、CT26．WT小鼠原位结肠癌模型的建立

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

二、黄芪-莪术配伍奥沙利铂对原位结肠癌小鼠模型CXCR3、CCR6、CXCL9、CCL20mRNA表达的影响

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

三、黄芪-莪术配伍奥沙利铂对原位结肠癌小鼠模型CXCR3、CCR6、CXCL9、CCL20蛋白表达的影响

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

参考文献

结语

附录

攻读硕士学位期间取得的成果

致谢