β-细辛醚通过调控胃癌PDKs表达增加化疗敏感性研究

摘要

研究目的:
　　观察β-细辛醚对不同分化程度胃癌细胞株体外化疗增敏作用;同时探讨β-细辛醚对胃癌PDKs表达的调控与化疗增敏机制的相关性。
　　研究方法:
　　1、采用MTT法观察β-细辛醚、顺铂单独与联合用药对多种胃癌细胞株的增殖抑制作用，利用中效原理计算合用指数来判定β-细辛醚和顺铂的协同增敏作用;使用Real-timePCR方法检测β-细辛醚、顺铂单独与联合作用人胃癌细胞后对化疗药物相关基因ERCC1、BRCA1表达的改变。
　　2、使用乳酸脱氢酶检测试剂盒检测不同浓度β-细辛醚(120μg·mL-1，60μg·mL-1，30μg·mL-1，15μg·mL-1)以及在Cocl2诱导(200mM24h)的缺氧环境和H2O2(100mM1h)诱导的有氧环境下对胃癌细胞乳酸脱氢酶生成量的影响，以明确β-细辛醚对PDK1活性的影响。
　　3、运用AnnexinV/PI双染法研究在Cocl2诱导(200mM24h)的缺氧环境和H2O2(100mM1h)诱导的有氧环境下β-细辛醚对不同分化程度的人胃癌细胞株凋亡的诱导作用;同时利用流式细胞仪检测对人胃癌细胞株的周期阻滞效应。
　　4、使用RT-PCR检测β-细辛醚对胃癌细胞有氧糖酵解相关基因PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的影响。
　　5、运用western blot检测β-细辛醚对有氧糖酵解相关蛋白PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表达的影响。
　　研究结果:
　　1、β-细辛醚作用于不同分化水平的胃癌细胞株对化疗药物顺铂均有化疗增敏作用，其中对MGC-803细胞株的化疗增敏效果最佳;β-细辛醚可以下调ERCC1、BRCA1基因表达。
　　2、不同浓度的β-细辛醚作用于胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-28后，细胞的乳酸脱氢酶含量受到抑制，且呈浓度相关;不同分化程度胃癌细胞之间没有相关性，缺氧条件下，β-细辛醚作用后的胃癌细胞LDH表达量明显下降，结果具有统计学意义。
　　3、β-细辛醚在缺氧及有氧条件下均可以诱导胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-28凋亡，能阻滞胃癌细胞于G2/M期，且β-细辛醚作用后呈现明显亚二倍体峰，提示其有诱导凋亡的作用。
　　4、β-细辛醚在缺氧条件下调胃癌细胞株PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的表达。
　　5、β-细辛醚在缺氧条件下可以抑制胃癌细胞株PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表达的影响。
　　研究结论:
　　1、β-细辛醚对不同分化水平的胃癌细胞株均有增殖抑制的作用，且呈浓度相关性;β-细辛醚在一定浓度范围内对顺铂化疗有化疗增敏的作用，其化疗增敏作用可能与抑制ERCC1、BRCA1基因表达有关。
　　2、β-细辛醚可以降低胃癌细胞乳酸脱氢酶生成量，呈浓度依赖性;β-细辛醚能降低缺氧条件下胃癌细胞株的乳酸脱氢酶含量，作用类似于H2O2组，提示其抑制肿瘤机制可能与抑制肿瘤细胞有氧糖酵解相关。
　　3、缺氧条件下β-细辛醚可以诱导胃癌细胞株凋亡，将阻滞胃癌细胞于细胞周期的G2/M期，同时实验表明β-细辛醚作用于不同分化程度胃癌后出现明显亚二倍体峰，提示其有诱导凋亡的作用。
　　4、β-细辛醚能有诱导胃癌细胞凋亡，其作用可能与抑制PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的表达，下调PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表达有关。上述基因及蛋白与糖酵解相关，进一步提示β-细辛醚抑制胃癌细胞增殖，与顺铂化疗增敏作用可能与其抑制肿瘤生长过程中有氧糖酵解相关。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 传统医学对胃癌的认识

1．1 病名的沿革

1．2 病因病机

2 现代医学对胃癌的认识

2．1 胃癌的病因

2．2 胃癌的治疗

3 有氧糖酵解在抗肿瘤代谢研究中的进展

3．1 糖酵解与抗肿瘤

3．2 糖酵解与PDKs

4 β-细辛醚的抗肿瘤作用的研究

第二部分 实验研究

第1节 β-细辛醚对胃癌细胞株的化疗增敏作用

1 实验试剂与设备

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第2节 β-细辛醚对胃癌细胞株的乳酸脱氢酶含量的影响

1 实验试剂与设备

2 实验方法

3．实验结果

4 讨论

第3节 β-细辛醚在缺氧及有氧环境下对胃癌细胞株的凋亡及周期的影响

1 实验试剂与设备

2．实验方法

3 实验结果

4 讨论

第4节 β-细辛醚对胃癌细胞株的糖酵解相关基因及蛋白的影响

1 实验试剂与设备

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第三部分 讨论

结语

不足和展望

参考文献

附表

致谢