柳松菇的功效性研究和桑黄的双向性新型发酵研究

摘要

该研究所选材料为柳松菇、灵芝和桑黄三种食药用担子菌，根据它们各自的效能和市场开发需要，从不同侧面对它们进行研究。柳松菇食味鲜美，营养丰富，深受大众喜爱，但对于柳松菇的研究目前主要集中在栽培育种方面，对其功效的研究则罕见详细报道。课题开展的柳松菇提取成分防护急性四氯化碳肝损伤和抗氧化等功效的研究，具有创新性，效果显著，在此基础上开发出了新产品“捷尔肝泰”。灵芝是名贵中药材，历史悠久，应用广泛，有极高的开发和利用价值。研究中按科学配方配制成灵芝多糖合剂，并进行抗辐射研究，在此基础上开发出了新产品“清辐宁”。在真菌中，桑黄的抗癌效果非常突出，该菌在韩国和日本尤其受欢迎，掀起了桑黄的开发热，但桑黄资源稀缺，基于此研究中用雷公藤为发酵基质，开展了桑黄菌的双向性液体发酵以及保肝功能等拓宽研究。 该论文包括两章共5个部分： 1.柳松菇对急性四氯化碳肝损伤的防护作用,此部分利用柳松菇水提物对小鼠急性四氯化碳肝损伤的防护作用进行研究。研究表明，柳松菇水提物中、低剂量组小鼠血清中ALT、AST活性均较模型组显著降低。肝脏病理切片结果显示，柳松菇水提物组肝细胞变性和坏死程度减小，病灶变小，胞浆凝聚和凝固性坏死等主要病理变化明显减轻。肝脏和血液中SOD活性增强、MDA含量下降，说明柳松菇水提物能够拮抗自由基对肝脏造成的损伤。结果证明，柳松菇对急性CCl4肝损伤有良好的保护作用。 2.柳松菇多糖的分离纯化及对肝损伤保护作用的研究,烘干研磨成粉的柳松菇子实体用热水提取，乙醇沉淀，Sevage法脱蛋白，用葡聚糖凝胶SephadexG-200柱层析进一步纯化，分离得到两种多糖PⅠ和PⅡ，醋酸纤维薄膜电泳证明两者各为均一组分，SephadexG-200柱层析测定分子质量分别为427.806KD和12.690KD。药理研究表明，柳松菇多糖和用醇提多糖上清液制备的黄酮对四氯化碳急性肝损伤均具有保护作用。 3.柳松菇组分抗自由基和脂质过氧化作用的研究,该实验对柳松菇子实体不同组分的抗氧化活性进行了研究，结果发现柳松菇对超氧阴离子自由基具有清除作用，以水提物效果最好，但比抗坏血酸弱。柳松菇对羟基自由基具有清除作用，其中醇提物、乙酸乙酯提取物和水溶性粗多糖的清除效果强于甘露醇。对肝匀浆脂质过氧化具有抑制作用，以柳松菇水溶性粗多糖效果最好，抑制作用强于甘露醇。结果表明柳松菇子实体中含有抗氧化成分，具有应用和开发价值。 附：灵芝多糖合剂抗辐射保健功能的研究,此部分采用赤芝子实体提取物--灵芝多糖和牛初乳合理配伍制成灵芝多糖合剂，以辐照小鼠为模型，进行抗辐射保健功能的研究。研究表明，服用灵芝多糖的小鼠，在60Co4Gy辐照后3天白细胞总数较模型组有显著提高(P＜0.01)，辐照后14天灵芝多糖合剂组SOD活性提高了13.68％，有显著性差异(P＜0.05)，根据这两项主要指标为阳性，说明灵芝多糖合剂具有抗辐射保健功能。 4.桑黄液体发酵优化培养条件的研究,此部分以桑黄菌丝体生物量为主要指标，观察发酵培养基中不同碳源、氮源等营养因子和接种量、装液量、初始pH等非营养因素对桑黄菌丝体生长的影响。结果表明，发酵14d，菌丝体生物量最高(1.62g/100mL)，发酵12d，胞内多糖含量最高(26.1％)；发酵14d，胞外多糖含量最高(15.6％)。桑黄菌丝深层发酵的优化条件为：起始pH自然，种子液摇瓶装量40％，接种量10％，发酵培养时间14d。 5.桑黄菌和雷公藤双向性液体发酵的研究,此部分旨通过桑黄菌雷公藤双向性液体发酵的研究，探讨二者之间的相互作用。结果表明雷公藤最佳添加剂量为5％。与普通发酵液相比，雷公藤能够明显促进桑黄菌丝体的生长，含雷公藤的发酵液中桑黄的最大菌丝量提高达14.7％。雷公藤还具有促进胞外多糖和皂甙生成的作用。在发酵过程中，雷公藤自身成分多糖和皂甙则由于受桑黄菌丝体合成代谢的影响而减少，这对降低雷公藤的毒性可能有重要意义。保肝功能研究发现，发酵12天的上述两种发酵液以及桑黄子实体提取物均具有防护小鼠急性CCl4肝损伤的作用。该研究对开拓药用真菌和中药材双向发酵技术具有重要的理论和实践意义。

目录

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第一章前言与综述

一、食药用真菌的生物学特性

1食药用真菌的生物学特性概述

2本研究中的三种食药用担子菌：柳松菇、灵芝和桑黄的主要生物学特性

二、真菌的成分和药理研究

1真菌的营养成分、活性物质和药理作用概述

2.柳松菇、灵芝和桑黄的成分和药理作用研究进展

三.真菌多糖的分子构型对生物活性的影响

四、真菌液体发酵的研究进展

1真菌液体发酵综述和展望

2真菌液体发酵测试手段的研究进展

3.真菌液体发酵目的物及发酵用途的研究进展

4中草药和真菌间双向性发酵的研究进展

5桑黄液体发酵的研究

五、结语

【参考文献】

第二章柳松菇子实体提取物药理及保健功能的研究

第一节柳松菇对急性四氯化碳肝损伤的防护作用

1材料与试剂

2方法

3结果与分析

4讨论

第二节柳松菇多糖的分离纯化及保肝作用的研究

1材料和方法

2结果

3讨论

第三节柳松菇组分抗自由基和脂质过氧化作用的研究

1实验材料

2抗氧化的测定方法实验方法

3结果

4讨论

附：灵芝多糖合剂抗辐射保健功能的研究

1材料与方法

2实验结果

3讨论

【参考文献】

第三章桑黄菌与雷公藤的双向性新型发酵的研究

引言

第一节桑黄液体发酵优化条件的研究

1材料和方法

2结果与分析

3讨论

第二节桑黄菌与雷公藤双向性发酵及其保肝功能研究(一)

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三节桑黄菌与雷公藤双向性发酵及其保肝功能研究(二)

材料与方法

2结果与分析

3讨论

【参考文献】

附录：科研论文

致谢