重组家蚕抗菌肽CM4抗真菌作用机理的研究

摘要

抗菌肽是体内先天免疫所产生的小分子物质，它们种类繁多，家族庞大，对细菌，真菌，病毒，原虫及癌细胞等都具有抑杀能力。灵活快速是抗菌肽发挥作用的一个特点。 昆虫中不含半胱氨酸的线性(Cecropin家族是最早发现的一类抗菌肽。抗菌肽CM4是由张双全等人从中国家蚕中诱导获得的线性、α-螺旋肽，已证明CM4是Cecropin家族中的一个成员。本实验室已经对抗菌肽CM4杀伤细菌及癌细胞的作用机理进行了深入的研究，但对CM4抗真菌的机制研究较少。 本论文利用毕赤酵母表达的重组家蚕抗菌肽CM4，通过一系列的细胞及分子水平的实验研究，试图探索抗菌肽CM4完整的抑杀真菌的机理，挖掘抗菌肽潜在的功能，并为抗菌肽最终开发成抗菌药物提供一定的依据。 我们通过孔穴法抗真菌实验，从十几种真菌中筛选了部分对抗菌肽CM4较敏感的菌株，最终以黑曲霉和绿色木霉等作为研究对象。细胞水平上，扫描电镜，透射电镜和激光共聚焦观察都显示，抗菌肽处理的真菌外部形态和内部结构都发生了很大的变化，出现了畸形，破裂，断残等现象。由于具有两亲性的α螺旋，抗菌肽CM4分子可能首先通过插入双层脂膜而破坏了真菌的膜结构，其次进入细胞内，使细胞器和细胞骨架造成了不同程度的损坏。 在以上工作的基础上，我们又进一步从分子水平研究了抗菌肽CM4对真菌的作用机制。凝胶阻滞实验证明，抗菌肽能与真菌的DNA和RNA结合，影响了它们在电泳中的迁移率，同时还能使核酸受到破坏，断裂为大小不等的片断。因而真菌细胞的代谢过程受到破坏，最终导致了真菌的死亡。 我们最后还通过抗菌肽对细菌及真菌作用机理的比较，为全方位了解抗菌肽CM4的杀菌作用机理，提供了一定的理论基础。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一部分文献综述 第一章昆虫抗菌肽的研究进展

第一部分文献综述 第二章抗真菌肽对真菌作用机制研究进展

第一部分文献综述 第三章抗菌肽杀菌作用的分子机制

第二部分实验研究 第一章抗菌肽CM4在毕赤酵母中表达条件的优化及蛋白的纯化

第二部分实验研究 第二章重组抗菌肽CM4抗真菌谱的测定及敏感菌株筛选

第二部分实验研究 第三章重组抗菌肽CM4抗真菌作用的形态学及分子定位研究

第二部分实验研究 第四章重组抗菌肽CM4抗真菌机制的分子水平研究

第二部分实验研究 第五章重组抗菌肽CM4对细菌及真菌的作用机制的比较

第三部分全文总结

附录

致谢