热休克蛋白70与辅分子伴侣CHIP下调凋亡信号调控激酶ASK1

摘要

凋亡信号调控激酶(Apoptosis signal—regulating kinase,ASK1),哺乳动物的MAPKKK家族的一员,能激活JNK与p38信号通路。尽管在过去的几年里关于ASK1在胁迫反应与先天性免疫的信号通路里的研究已经取得很大的研究进展,但是当前关于ASK1的自身稳定性研究还不清楚。本研究表明,HSP70(Heat ShockProtein70)与HSP70 C端相互作用蛋白CHIP(C-terminus of heat shock protein70-interacting protein)负调控ASK1表达。
　　 有几个相关数据支持上面提到的HSP70与CHIP负调控ASK1表达的观点,在静息细胞中内源与外源表达的ASK1与HSP70与CHIP三者存在相互作用,并且这种相互作用与ASK1自身的酶活性无关。在人类胚胎肾细胞293(HEK293)中,过表达实验与RNA干扰实验都充分证明了HSP70与CHIP下调ASK1,这种下调作用与ASK1、CHIP、HSP70三者存在相互作用是相符合。HSP70与CHIP协同下调ASK1表达究其根源是由于HSP70与CHIP促使ASK1依赖泛素的蛋白酶体降解。过表达HSP70下调ASK1依赖于CHIP的参与；在HSP70的突变体与CHIP与ASK1共表达的实验中,HSP70能够逆转CHIP下调ASK1的表达,这表明在CHIP下调ASK1的过程中,HSP70是必不可少得。在ASK1、CHIP、HSP70相互作用的过程中,HSP70的N端与ABD domain与ASK1相互作用,ASK1的激酶domain与HSP70相互作用,HSP70与ASK1的这些相互作用的位点在HSP70泛素化降解ASK1的过程中是必需得。
　　 因此,热休克HSP70与其辅助分子伴侣CHIP协同下调ASK1,这可能为HSP70/CHIP的抗凋亡提供一个新的机制。

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

第一节 ASK1的研究进展

第二节 HSP70研究进展

第三节 CHIP的研究进展

第四节 RNA干扰研究进展

参考文献

第二章 HSP70RNA干扰表达载体的构建

第一节 RNA干扰

第二节 HSP70RNA干扰表达载体的构建

第三章 热休克蛋白HSP70与其辅分子伴侣CHIP下调凋亡信号调控激酶1

第一节 HSP70促使ASK1蛋白泛素化降解

第二节 CHIP泛素化降解ASK1

第三节 CHIP与HSP70两者对ASK1的泛素化与降解

本章讨论与分析

参考文献

结论

附录

附录1 试剂配制

附录2 实验流程

附录3 主要仪器设备

附录4 博士研究生在读期间发表的论文

致 谢