干扰素诱导表达的基因在SLE实验诊断中的应用基础研究

摘要

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一种累及多系统的自身免疫性结缔组织病，有着极为广泛的临床表现，其特征是免疫系统的紊乱，导致抗核抗体（Antinuclear Antibody，ANA）、其他自身抗体的产生和免疫复合物的沉淀以及补体系统的激活。SLE的发病机理是非常复杂的，包括环境因素和遗传因素。近年来研究表明，干扰素（Interferon，IFN）家族及其免疫调控通路可能在SLE 发病中具有重要作用[1，2]，大多数SLE 患者Ⅰ型IFN 诱导的基因呈高表达[3-6]。与Ⅰ型IFN（主要包括IFN-α和IFN-β基因）结合的受体复合物由两个亚单位-IFNAR1和IFNAR2 组成，它们的细胞内结构域分别与Janus 家族的蛋白酪氨酸激酶（Jak 激酶）相联。Ⅰ型IFN与IFNAR 结合使Jak 激酶活化，从而使IFNAR1、Stat1和Stat2 磷酸化。这些Stats 回到磷酸化的IFNAR1 形成了两个特殊的转录激活因子-IFN-α活化因子（GAF）和IFN 刺激基因因子3（ISGF3），它们转移到细胞核中，分别与被称为IFN-γ激活序列（GAS）和IFN 刺激应答原件（ISRE）的特殊DNA 序列结合，从而诱导成千上万的靶基因转录[7-10]。
　　 SLE的临床表现复杂多样，多器官受累，其诊断和鉴别诊断一直是临床上的难点，而对于诊断明确了的SLE 患者，其病情活动状态也难以确定，治疗用药往往缺乏量化依据。因此临床迫切需要既能反映疾病活动性又具有敏感性和特异性的指标，为临床诊治提供依据。
　　 本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法对84 例SLE 患者与64名正常对照（NC）人外周血单个核细胞（PBMC）中5种IFN 诱导基因（IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL 及ISG15）的表达水平（以-ΔΔCt 值表示）进行了检测，同时检测了其抗ds-DNA 抗体、ANA、抗ENA 抗体、C 反应蛋白（CRP）、补体C3、C4、红细胞沉降率（ESR）等指标，分析这5种基因mRNA 表达水平以及上述检测指标与疾病活动度之间的相关性，并比较这5种基因表达水平及上述指标在反映SLE 病情活动度方面的协同性与差异。
　　 实验结果表明，SLE 组与NC 组相比，IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL 及ISG15mRNA 表达显著增高（P<0.001）；SLE活动组与缓解组比较，这5种基因的表达也均增高（P<0.01）；且SLE 组中这5种基因的表达水平均与SLEDAI 积分呈显著正相关（r>0.5，P<0.05），表达水平之间也呈正相关（r>0.5，P<0.05）。
　　 其他实验指标检测结果表明，抗ds-DNA 抗体与SLEDAI 积分呈正相关（r>0.5，P<0.05），且SLE 患者组与NC 组之间、SLE活动组与缓解组之间阳性率差异均有统计学意义（P<0.01）。同时，补体C3、C4与SLEDAI 积分呈负相关（r<-0.5，P<0.05），ESR与SLEDAI 积分呈正相关（r>0.5，P<0.05），且它们在SLE 患者组与NC 组之间、SLE活动组与缓解组之间阳性率差异也具有统计学意义（P<0.05）。ANA 滴度与SLEDAI 积分无相关性，不能反映疾病活动度，但是ANA 均质性与斑点型的两种荧光核型在SLE活动组与缓解组之间的阳性率差异均有统计学意义（P<0.05）。抗ENA 抗体虽不能反映疾病活动度，且在SLE活动组与缓解组之间阳性率差异无统计学意义（P>0.05），但在SLE 患者及NC 组中的阳性率差异具有统计学意义（P<0.05）。CRP 也与SLEDAI 积分无相关性，其阳性率在SLE活动组与缓解组之间差异无统计学意义（P>0.05），但在SLE 组与NC 组之间差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　 结论:
　　 （1）IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL 及ISG15的表达水平在SLE 患者中显著增高，并且与SLEDAI 积分呈显著正相关，对SLE 患者病情活动度和病情严重度的判断均有较大价值，抑制这5种基因的表达可能为SLE的治疗提供新的靶点，同时为SLE的鉴别诊断和治疗提供了理论依据。
　　 （2）抗ds-DNA 抗体、ESR与SLEDAI 积分呈正相关，而补体C3、C4与SLEDAI积分呈负相关，它们均能够反映SLE 疾病活动度，可以作为判断SLE 病情活动的重要参考指标。虽然ANA、抗ENA 抗体及CRP与SLE 病情活动度无明显关系，但是ANA、抗ds-DNA 抗体及抗ENA 抗体的联合检测可以提高对SLE 诊断的敏感性和特异性，为SLE的鉴别诊断提供了实验依据。
　　 （3）以IFN 诱导基因的表达水平作为SLE的检测指标与其他常规检测指标相比，不仅能够反映疾病活动性，而且具有敏感性和特异性，为临床的鉴别诊断及靶向治疗提供了理论依据，具有广阔的应用前景。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

第一章 荧光定量RT-PCR检测PBMC中IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15 mRNA的表达

第二章 SLE患者血浆中抗ds-DNA抗体、ANA及抗ENA抗体的检测及临床意义

第三章 SLE 非特异性活动度指标的检测

全文小结

参考文献

研究生期间发表的论文

致谢