H2O2对大鼠睾丸Leydig细胞功能的调节及Peroxiredoxin 2在其中的作用

摘要

迟发性性腺功能减退症(late-onset hypogonadism，LOH)最近被定义为中老年男性低睾酮的一种综合症。男性衰老会伴随着血清睾酮水平的下降，主要引起的临床表现为性功能障碍、机体肌肉含量下降、骨矿物质减少和其他生理参数下降等。睾酮主要产生于睾丸Leydig细胞，中老年男性Leydig细胞数量减少和功能减退导致血清睾酮水平下降是引起LOH发病的核心机制。
　　细胞在代谢的过程中会伴随着大量ROS产生，包括H2O2、羟基自由基和超氧阴离子等。在Leydig细胞内ROS的积累会抑制睾酮合成酶基因的表达导致睾酮合成下降。Peroxiredoxin2(Prdx2)是过氧化物酶家族的成员之一，具有将过氧化氢(H2O2)还原成水的能力，以清除细胞内多余的活性氧分子。本实验用不同低浓度的H2O2刺激大鼠睾丸Leydig细胞，研究低水平的H2O2对Leydig细胞凋亡和睾酮分泌的影响;验证Prdx2在Leydig细胞中表达;探索在H2O2不同剂量和不同时间刺激下，Prdx2在Leydig细胞中表达的变化。
　　本课题研究中用低浓度H2O2诱导大鼠睾丸Leydig细胞氧化应激，检测细胞内MDA水平，采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化，应用化学发光法检测细胞睾酮分泌的变化;再通过Western blot和实时荧光定量PCR方法检测Prdx2在Leydig细胞中mRNA水平和蛋白水平表达的变化。研究结果表明细胞内MDA水平显著增加，随着H2O2浓度的升高和时间的延长，细胞凋亡率上升、存活率和睾酮分泌下降。用RT-PCR和Western blot两种技术分别从RNA水平和蛋白水平验证Prdx2在Leydig细胞中表达。我们进一步研究低浓度H2O2作用下Prdx2在大鼠睾丸Leydig细胞中表达的变化，发现随着H2O2浓度的增加，Prdx2蛋白表达呈现下降的趋势。同时研究发现，随着H2O2对细胞孵育时间的延长，Prdx2蛋白表达也呈显著下降。而Prdx2在mRNA水平上并无显著变化。
　　由此我们得出结论，低浓度范围内的H2O2会导致大鼠睾丸Leydig细胞凋亡、细胞存活率和睾酮分泌下降。这些可能是引起LOH发生的主要原因之一。低浓度H2O2作用下，Prdx2蛋白在Leydig细胞表达呈现下降的趋势，可能是由于H2O2的作用下，Prdx2分子结构的发生了转变。得出Prdx2具有清除H2O2的能力，减少H2O2在细胞内积累，进而保护了由氧化应激诱导的Leydig细胞凋亡和睾酮合成的下降，为LOH的治疗和预防提供了理论价值。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

参考文献

第二章 H2O2对大鼠睾丸Leydig细胞凋亡及睾酮分泌的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三章 氧化应激条件下Prdx2在大鼠睾丸Leydig细胞表达的变化

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

综述 过氧化物还原酶家族与相关疾病的研究进展

在读期间发表的学术论文与研究成果

致谢