难以再生菜豆不定芽的诱导

摘要

植物再生技术是遗传转化的基础，在农业生产、植物保护等方面都起到促进作用。但不同种类的植物在再生能力上表现出巨大差异，部分植物的再生存在困难（如:水稻、玉米等的成熟组织），菜豆(Phaseolus vulgaris L.)亦为难再生植物中的一种。本研究以菜豆为试验材料，对其进行了不定芽诱导的研究，同时也为其它难以再生植物不定芽的诱导提供参考。主要研究结果如下:
　　首先，以菜豆下胚轴为外植体，探究不同浓度组合的生长素(2，4-D、NAA、IBA)和细胞分裂素（6-BA、TDZ、KT）对其愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明，多数组合的愈伤组织诱导率为100.00％，而MS培养基中则无愈伤组织的形成。其中，MS+1.5μmol·L-1NAA+1μmol·L-1TDZ培养基中愈伤组织的平均鲜重和平均干重最高分别为1.0322±0.0386g和0.0868±0.0016g，但愈伤组织皆呈褐色，质地疏松，且无不定芽产生。后以MS+1.5μmol·L-1NAA+1μmol·L-1TDZ为基本培养基，以下胚轴为外植体，探究活性炭、抗坏血酸、硝酸银对抑制愈伤组织褐化的影响。结果表明，愈伤组织褐化并没有得到减轻。
　　由于菜豆下胚轴在诱导愈伤组织的过程中出现褐化，且无法产生不定芽，故更换外植体取材部位，尝试以菜豆的根段为外植体，探究不同浓度组合的生长素(2，4-D、NAA、IBA)和细胞分裂素（6-BA、TDZ、KT）对根外植体愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明，多数组合的愈伤组织诱导率为100.00％，而MS培养基中无愈伤组织的形成。其中，最佳诱导培养基为MS+1μmol·L-12，4-D+10μmol·L-1TDZ，愈伤组织平均鲜重及平均干重最大分别为0.2971±0.0189g和0.0317±0.0017g，且愈伤组织呈淡绿色，结构致密，但无不定芽产生。
　　为获得不定芽，以MS+1μmol·L-12，4-D+10μmol·L-1TDZ诱导的根愈伤组织为试验材料，探究不同浓度组合的NAA、IBA和6-BA、TDZ、KT对愈伤组织继代培养和分化的影响。结果表明，外植体在含有IBA和TDZ的MS培养基中可以诱导出具有最大鲜重和最大干重的愈伤组织，但愈伤组织呈深褐色，质地疏松。后探究一种生长素(NAA、IBA)和两种细胞分裂素(6-BA、TDZ、KT)的不同浓度组合对愈伤组织继代培养和分化的影响。结果证明，与单独使用一种细胞分裂素相比，同时使用两种细胞分裂素诱导出的愈伤组织结构呈褐色，质地疏松，不利于不定芽的诱导。
　　基于以上研究以及对相关文献的综合分析，采用含有10μmol·L-1TDZ的MS培养基对菜豆种子进行预培养，并以菜豆上胚轴薄片为外植体，以B5液体培养基为基本培养基，探究不同浓度6-BA或TDZ对菜豆再生的影响。结果表明，当TDZ浓度为15μmol·L-1时，诱导不定芽的效果最好，不定芽诱导率为25％。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1 菜豆再生

1．1 菜豆简介

1．2 菜豆再生研究进展

1．3 影响莱豆再生的因素

2 本研究的目的、意义、思路

第二章 菜豆下胚轴愈伤组织的诱导

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 不同灭菌方法的灭菌效果

2．2 生长素与细胞分裂素不同浓度组合对下胚轴愈伤组织诱导的影响

3 讨论与总结

第三章 菜豆愈伤组织褐化的研究及根愈伤组织的诱导

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 愈伤组织褐化

2．2 生长素与细胞分裂素不同浓度组合对根愈伤组织诱导的影响

3 讨论与总结

第四章 根愈伤组织继代培养

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 双激素组合对根愈伤组织继代培养的影响

2．2 多激素组合对根愈伤组织继代培养的影响

3 讨论与总结

第五章 菜豆上胚轴薄片不定芽的诱导

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 不同浓度6-BA对菜豆不定芽诱导的影响

2．2 不同浓度TDZ对菜豆不定芽诱导的影响

3 讨论与总结

全文结论与展望

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文及研究成果

致谢