鸭疫里氏杆菌2型可能的毒力基因片段的发现及该菌无致病力株的分离与鉴定

摘要

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)感染是危害养鸭业的主要细菌性传染病。除直接引起感染鸭出现急性或慢性败血症、纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎和脑膜炎等发生死亡外，还可以引起干酪性输卵管炎、关节炎、结膜炎等。目前已发现21个血清型，各种血清型之间很少有交叉保护性。其中鸭疫里氏杆菌2型最为常见。国内外虽然对RA有一些研究，但是在毒力因子、致病机理、保护性抗原等方面的研究尚未充分展开。 从健康鸭咽部分离到一株革兰氏阴性短杆菌，定名为LY-58株。经培养性状、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及PCR鉴定，分离株鉴定为鸭疫里氏杆菌2型。毒力测定实验中，将不同浓度的菌液腿部肌肉注射10d健康北京鸭，每组7羽(1mL/羽)，共5组。结果显示，RA2型参考株RAF2株的LD<,50>为5.57×10<'7>CFU，而分离株LY-58以1.0×10<'10>CFU注射实验动物无一死亡，可确定为无致病性。 为寻找RA可能的毒力基因，本研究以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及无毒力株LY-58为研究对象，应用抑制性差减杂交技术，构建了DNA差减文库，并转化大肠杆菌DH5a进行文库扩增，获得600个克隆。随机挑取96个白色克隆进行菌落PCR鉴定，扩增出100-1000bp大小的片段，并将其进行测序，测序结果递交GenBank进行同源性查找，发现15个可能的新的毒力基因片段。该15个差异片段，即片段3<'＃>，49<'＃>，50<'＃>，62<'＃>，51<'＃>，57<'＃>，41<'＃>，45<'＃>，56<'＃>，43<'＃>，6<'＃>，30<'＃>，52<'＃>，5<'＃>，39<'＃>，在GenBank上的登录号分别是：DQ508421，DQ508422，DQ508423，DQ508424，DQ508425，DQ508426，DQ508427，DQ508428，DQ508429，DQ508430，DQ50843l，DQ508432，DQ508433，DQ508434，DQ508435。这在国内外尚属首次报道。这一发现将有助于开展RA致病机理的研究，并为RA毒力株检测方法的建立奠定基础。

目录

文摘

英文文摘

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A篇文献综述 第一章鸭疫里氏杆菌病的研究进展

A篇文献综述 第二章抑制性差减杂交技术及其应用研究进展

B篇试验研究 第一章一株无致病力的鸭疫里氏杆菌的分离与鉴定

B篇试验研究 第二章鸭疫里氏杆菌2型可能的毒力基因片段的发现

全文总结

附录

致谢