禽致病性大肠杆菌IMT5155株毒力相关基因片段E9的表达及生物学特性分析

摘要

根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在0RF的部分序列。将PCR产物进行了T／A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS—PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32．2 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性。对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验。rn 结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用。