华南地区屠宰猪群中猪链球菌的流行病学调查及地方株的特性研究

摘要

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原，可分为35个血清型(1～34型及1/2型)。大多数由猪链球菌引起的临床疾病均与几种主要血清型(如1型、1/2型、2型、7型、9型和14型)有关。健康猪可在上呼吸道隐性带菌，是该菌在猪群中传播的重要传染源。猪链球菌根据致病性的不同可分为强毒株、弱毒株和无毒株。其致病性与毒力因子有关，已发现多种毒力因子。但根据已知的毒力因子不能完全解释SS2分离株之间的致病性差异，动物试验仍是当前区分SS2毒力唯一有效的方法。 1．华南地区屠宰猪群扁桃体内猪链球菌的携带情况2006年5至10月间从广东省部分地区肉联厂采集屠宰猪扁桃体401份，其中粤西地区115份、珠三角地区80份、广东周边各省206份。用两个多重PCR检测样品中猪链球菌(SS)及其6个主要致病血清型。检出154份(38.4％)样品SS为阳性，其中69份(17.2％)携带SS2(SS1/2)，35份(8.7％)携带SS9，而SS7和SS1(SS14)较少，各为9份(2.2％)和3份(0.7％)。不同血清型SS菌株可混合感染同一头猪，其中混合感染SS2(SS1/2)和SS9的样品最多，18份(4.49％)；6份(1.50％)样品混合感染SS2(SS1/2)和SS7，4份(1.00％)混合感染SS7和SS9；也有样品混合感染SS2(SS1/2)、SS7和SS9三种以上血清型，但仅3份(0.75％)。在地区分布上，粤西地区采集扁桃体中SS阳性率(18.3％)明显低于其他地区(p＜0.01)。其余各地区之间均无显著差异(p＞0.05)，阳性率均在35％～70％之间。对全部样品进行细菌分离，共分离到SS 53株，分离率为13.21％；其中SS2(SS1/2)25株(6.23％)，SS93株(0.75％)，SS71株(0.25％)，未定型SS 24株(5.99％)。细菌分离结果与PCR检测结果符合率较高，但细菌分离的阳性率远比PCR检测结果低。有286个样品SS的PCR检测和细菌分离的结果一致，符合率为71.32％。108个样品PCR检测结果为阳性，但细菌分离结果为阴性;7个样品的检测结果与上述情况相反。PCR检测的SS阳性率要比细菌分离高25％。证实了华南地区猪群中广泛存在SS，呈多个血清型并存、几个血清型混合感染，以及流行呈地域性等特点。 2．猪链球菌扁桃体分离株的毒力基因分布特征设计并合成7对引物，用PCR方法对猪链球菌7种主要毒力基因，包括谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶血素(sly)、胞外因子(ef)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、三磷酸甘油醛脱氢酶(gadph)和毒力相关序列orf2进行检测，分析了29株猪链球菌扁桃体分离株的毒力基因分布特征。在被检的25株2型菌株中，共检测出7个基因型，其中10株(40％)同时具有上述7种毒力基因，7株(28％)缺失sly和ef基因，4株(16％)仅缺失sly基因，1株仅缺失orf2基因，1株缺失sly、ef和orf2三个基因，1株缺失sly和ef基因且携带长片段mrp基因，1株缺失sly、ef、mrp、fbps和orf2五个毒力基因；1株猪链球菌7型分离株缺失ef和mrp两个基因；3株猪链球菌9型分离株均缺失sly、ef和mrp三个毒力基因。可见我国SS分离株的毒力基因分布较为复杂，且SS2的优势流行菌株是同时具有多种毒力基因的高致病菌株，值得关注。 3．猪链球菌2型关节炎分离株和9型脑膜炎分离株的特性分析2005年夏秋季从广东地区9例病猪中分离到2株猪源链球菌，形态均呈链球菌的特征，α溶血，生化试验结果相似，且都不与A～G链球菌群特异性血清发生凝集。经PCR及测序鉴定，一株为猪链球菌2型，另一株为猪链球菌9型。2型分离株的三个毒力基因均为阳性(sly<'+> ef<'+> mrp<'+>)，但对小鼠的毒力较低，小鼠在接种细菌6～15天后发病致死，细菌在小鼠中的带菌时间会有15d或者更长；9型分离株三个毒力基因均阴性(sly<'-> ef<'-> mrp<'->)，但对小鼠有较强毒力，小鼠在接种细菌5天内发病死亡，对小鼠的半数致死量为1.70×10<'6>CFU。表明广东地区致病性猪链球菌不仅存在2型，而且还有9型。 4．猪链球菌2型西藏微型猪感染模型的初步建立选取3个流行病学背景不同的猪链球菌2型菌株人工感染西藏微型猪，探讨西藏微型猪作为猪链球菌2型毒力评价模型动物的可行性。12头西藏微型猪分成4组，A组为阴性对照组接种肉汤培养基，B、C、D三组分别接种猪链球菌2型分离株：GZ06-122B、SH06-21D和HA9801。GZ06-122B株和SH06-21D株分离自华南地区健康猪的扁桃体，毒力基因表型分别为sly-/mrp-/ef-和sly+/mrp=/ef+。HA9801株分离自江苏患败血症死亡的猪体内，毒力基因表型为sly+/mrp+/ef+。接种GZ06-122B株的试验猪无明显临床症状，体温不升高，血液循环中也无细菌出现；试验猪感染SH06-21D株和HA9801株后临床症状显著，尤其是感染HA9801株后，出现体温升高、跛行和神经症状，甚至死亡。攻击后1周内，C组试验猪痛死1/3头，D组2/3头。表明HA9801株有毒力较强，SH06-21D株次之，GZ06-122B株的毒力较弱，证实了西藏微型猪对猪链球菌2型有一定易感性，且可用于区分不同猪链球菌2型分离株的毒力强弱。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：符号说明

声明

第一篇文献综述

第一章猪链球菌的研究进展

1病原学

2流行病学

3临床表现及病理变化

4致病机理

5毒力因子

6检测与鉴定

7防控

参考文献

第二篇试验研究

第二章华南地区屠宰猪群扁桃体内猪链球菌的携带情况

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第三章猪链球菌扁桃体分离株的毒力基因分布特征

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3 讨论

参考文献

第四章猪链球菌2型关节炎分离株和9型脑膜炎分离株的特性分析

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第五章猪链球菌2型西藏微型猪感染模型的初步建立

摘要

引言

1材料和方法

2结果

3 讨论

参考文献

全文总结

致谢