菊花缓慢生长离体保存研究

摘要

建立在组织培养基础上的缓慢生长离体保存是在保证植物种质遗传完整性的前提下减缓试管苗的生长，减少继代次数，达到中期保存植物种质资源的目的，是植物种质保存中常用的方法。本研究以夏花型盆栽小菊品种‘火炬’和秋花型切花菊品种‘神马’的无菌试管苗为材料，研究了试管苗保存过程中不同添加物和不同培养条件对保存效果的影响，并从形态学、同工酶水平及分子水平对保存材料再生后代的遗传稳定性进行检测，以期为实现菊花种质资源的中长期保存提供理论和实践依据。主要研究结果如下： 1．培养基养分水平对菊花试管苗离体保存的影响 室温(25±2)℃下，1/4MS或1/2MS+0.3mg.L<'-> 6-BA+0.1mg.L<'->NAA+30g.L<'->蔗糖+7g.L<'->琼脂均能有效减缓‘火炬’试管苗的生长，12个月后均100％存活，而对‘神马’的抑制效果则不理想。 2．植物生长抑制物质对菊花试管苗离体保存的影响 Ms+0.3mg.L<'-> 6-BA+0.1mg.L<'->NAA+30g.L<'->蔗糖+7g.L<'->琼脂的伸长培养基中分别添力口1250～2000mg.L<'->CCC、200～600mg.L<'->B<,9>、35～140mg.L<'->SA均能使‘火炬’和‘神马’两个品种试管苗延长保存至10个月以上，尤以1750mg.L<'->CCC、200mg.L<'-> B<,9>、140mg.L<'->SA的保存效果较为理想，试管苗保存10个月后生长健壮，株高矮小适宜，‘火炬’和‘神马’两个品种存活率分别为74.07％和40.74％、81.48％和74.07％，100％和100％。20mg.L<'-> ABA适宜于‘火炬’试管苗的离体保存，‘神马’则是80mg.L<'->的ABA抑制效果最好，两个品种的试管苗分别在这两个浓度下保存10个月后均100％存活，且植株生长良好。3～5mg.L<'->PP<,333>和5～9mg.L<'-> PP<,333>分别能使‘火炬’和‘神马’比CK延长存活3个月，而高浓度(7～9mg.L<'->)PP<,333>对‘火炬’试管苗有毒害作用，3mg.L<'-> PP<,333>对‘神马’试管苗抑制作用不明显。 3．蔗糖及甘露醇对菊花试管苗离体保存的影响 0～10g.L<'->蔗糖可用于‘神马’试管苗的短期(如越夏)保存，对于‘火炬’则不适宜，高浓度(60～90g.L<'->)蔗糖可使‘火炬’试管苗的保存时间延长至7个月以上，但对于‘神马’则具有加快衰老的作用。培养基中5～10g.L<'->甘露醇完全替代蔗糖可使‘神马’试管苗比cK延长存活7个月；10、30g.L<'->蔗糖+10g.L<'->甘露醇，10、20g.L<'->蔗糖+20g.L<'->甘露醇均能使菊花试管苗连续保存12个月，其中，后两个组合处理保存12个月后成活率较高，分别达到50.00％、60.00％。无论是甘露醇完全替代蔗糖还是与蔗糖配合使用，均不适宜于‘火炬’的离体保存。 4．不同低温处理对菊花试管苗离体保存的影响 接种在伸长培养基中的‘火炬’和‘神马’的去叶茎段直接置于4℃低温、‘火炬’的去叶茎段和‘神马’的带叶茎段直接置于10℃低温、‘火炬’的去叶或带叶茎段不经过预培养和‘神马’的带叶茎段正常条件下预培养15d后置于15℃低温下进行保存，植株生长缓慢，株高均大幅度降低，且保存12个月后仍保持较高的存活率，分别为74.07％和77.78％、100％和74.07％、85.19％和81.48％。 5. 10、15℃低温下培养基养分水平、PP<,333>和CCC对菊花试管苗离体保存的影响 ‘火炬’的去叶茎段接种在MS上于10～15℃下保存12个月后，植株生长良好，且100％存活。10、15℃低温下，试管苗保存12个月后，添加PP<,333>及CCC各处理的存活率高于室温下相应处理，但低于相应温度下的CK，其中，两个品种的试管苗在附加3mg.L<'-1>PP<,333>的培养基上于10℃下保存12个月后，存活率较高，同于或接近最高的CK处理，且植株长势良好、矮小健壮、叶色浓绿；‘火炬’试管苗在附加1750mg.L<'-1> CCC的培养基中于10～15℃下保存12个月后存活率高，且植株生长矮小健壮，叶色浓绿，长势良好；‘神马’试管苗于10～15℃下在附加CCC的培养基中存活率下降明显。 6．再生后代的遗传稳定性鉴定 上述方法保存后的试管苗恢复生长能力正常，并且保存材料再生后代的形态学、过氧化物酶(POD)及酯酶(EST)同工酶酶谱、ISSR扩增图谱与CK株相比无差异，保持了良好的遗传稳定性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

引言

第一部分文献综述

1问题的提出

1.1植物种质资源保存的重要性

1.2开展植物种质资源离体保存的必要性

2前人研究进展

2.1植物种质资源缓慢生长保存技术研究进展

2.2植物种质资源离体保存过程中的遗传变异研究

3本研究的目的及意义

第二部分试验研究

第一章低温及养分对菊花离体保存的影响

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

图版及图版说明

第二章蔗糖及甘露醇对菊花离体保存的影响

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

图版及图版说明

第三章生长抑制物质对菊花离体保存的影响

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

图版及图版说明

第四章温度与养分、延缓剂复合处理对菊花离体保存的影响

1材料与方法

2结果与分析

3 讨论

4 小结

图版及图版说明

全文总结

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文及获奖情况

致谢