淡紫拟青霉的发酵条件研究及其与线虫互作机理研究方法的初探

摘要

植物线虫对许多经济作物造成严重的危害，可导致作物大幅减产。对于植物线虫的防治，历来以化学药剂为主，而化学药剂带来的负面影响，使得生物防治的研究成为热点。淡紫拟青霉属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，也能侵染幼虫和雌虫，从而影响其正常的生长发育。目前，该茵已经作为生物杀线剂工业化生产了。 本研究对本实验室两淡紫拟青霉菌株进行了最佳发酵参数的测定；利用不同的液体培养基对淡紫拟青霉的不同指标进行了测定，并对其指标进行了相关性分析；对淡紫拟青霉与线虫互作机理作了初步的分子研究。其结果如下： 1．通过对淡紫拟青霉(PL1与PL2)发酵参数：温度、通气量、转速、培养时间、pH值、接种量的测定，实验得出：淡紫拟青霉最佳生长温度为28℃；最佳装瓶量为100ml；最佳转速为120 rpm；最佳培养时间为7-9d；适宜生长PH值为6-9；容积为250ml的锥形瓶，装瓶量为150ml，其最佳接种量为1个直径为0.5cm的菌块，。同时也发现PL1在各种不同发酵参数下其产孢量均比PL2高，所以PL1菌株优于PL2。 2．通过不同的液体培养基对淡紫拟青霉进行培养，对孢子浓度、菌体重量、上清液毒力、上清液中的蛋白酶活性进行了测定，得到一种高产孢量的培养基，其主要成分为：PS+eggyolk，为工业化生产提供选择性材料。在10天内，孢子浓度与菌体重量基本上随时间先呈递增变化，然后基本保持恒定；而上清液毒力与蛋白酶活力随时间呈上下波动或逐渐递增。通过相关性分析，发现孢子浓度和菌体重量之间的相关性较高，上清液毒力与蛋白酶活力之间的相关性较低。 3．根据淡紫拟青霉的丝氨酸蛋白酶基因、几丁质酶基因、甘露聚糖酶基因和线虫基因设计了五对引物：β-tubulin、chittinase、 serine proteinase、mannanase、β-actin，通过引物特异性分析，验证了前四对引物为淡紫拟青霉的特异性引物，这就为进一步研究虫菌互作机理奠定了基础。 本研究的创新点在于国内外首次研究淡紫拟青霉与线虫互作前后相关酶在基因水平上的表达情况。通过数次实验，现已得到了相关酶基因的特异性引物，为进一步相对定量奠定了基础；筛选到一种价格低廉、产孢量很高的培养基：PS+eggyolk，为工业化生产提供了原料。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

上篇 文献综述

第一章淡紫拟青霉的研究与应用现状

1. 分类学地位

2. 分布及寄主

3.生物学性状

4.生态学

5.分离方法及大量培养技术

6.对植物寄生线虫的生防机制与防治效果

7.不同因子对防治效果的影响

8代谢产物

9淡紫拟青霉在防治植物寄生线虫中的应用

10真菌杀线虫剂产业化存在的主要问题

11.安全性评价

第二章实时定量PCR技术研究现状与应用

1实时荧光定量PCR技术的方法学

2定量RT-PCR方法的优点及限制因素

3实时荧光定量PCR技术的应用

下篇 研究内容

第一章 淡紫拟青霉最佳发酵条件研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第二章不同液体培养基对淡紫拟青霉繁殖和毒力的影响

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三章淡紫拟青霉与线虫互作前后的RT-PCR初步研究

1材料与方法

2.实验结果

3.讨论

全文结论

参考文献

附 录

致谢