大米蛋白酶解物抗氧化作用研究

摘要

本研究以大米蛋白为原料，探讨大米蛋白酶解物的抗氧化作用。通过体外试验，确定大米蛋白最佳酶解条件及最佳抗氧化效果的添加剂量；进一步采用昆明系小鼠体内试验，研究大米蛋白酶解物对正常小鼠血浆、肝脏和肾脏抗氧化功能的影响，旨在为大米蛋白抗氧化肽的开发利用提供科学依据。 一、大米蛋白抗氧化酶解条件的优化试验 选用枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解大米蛋白，以羟自由基清除率作为测定指标，通过单因素和正交试验优化酶解条件，确定不同蛋白酶酶解大米蛋白的最佳酶解条件：(1)枯草杆菌蛋白酶：pH7.5、酶浓度7.0％、温度55℃和时间200min，在此条件下羟自由基清除率为79.59％，多肽浓度为8.54mg/mL；(2)木瓜蛋白酶：pH7.0、酶浓度5.0％、温度55℃和时间100min，在此条件下羟自由基清除率为52.80％，多肽浓度为1.88mg/mL；(3)胃蛋白酶：pH1.0、酶浓度5％、温度37℃和时间200min，在此条件下，羟自由基清除率为61.04％，多肽浓度为7.35mg/mL。 二、大米蛋白最佳抗氧化蛋白酶的筛选试验 采用正交试验优化得出的三种蛋白酶(枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶)的最优抗氧化酶解条件，对每个正交试验的最佳酶解产物采用同一批次进行比较，分别测定了不同处理下总还原性、羟基自由基、DPPH自由基、小鼠肝线粒体肿胀及肝组织匀浆液脂质过氧化作用的影响。结果表明：(1)不同处理的大米蛋白酶解物在体外表现出明显的清除自由基，抑制组织脂质过氧化反应，且抗氧化活性显著高于未酶解的大米蛋白；(2)不同大米蛋白酶解物抗氧化活性大小为：RPHP>RPHS>RPHM。(3)体外条件下大米蛋白的最佳抗氧化酶解条件为：胃蛋白酶，pH1.0、酶浓度5％、温度37℃和酶解时间200min。 三、大米蛋白酶解物RPHP体外清除自由基及抗脂质过氧化作用研究试验 采用比色法测定了不同剂量的大米蛋白酶解物对清除超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基及抗脂质过氧化的作用。结果表明：(1)大米蛋白酶解物能有效地清除自由基O<,2><'->、OH及DPPH，在50mg pro/mL时，对活性氧自由基清除效果最佳；(2)大米蛋白酶解物可抑制小鼠肝组织的脂质过氧化，尤其对Fe<'2+>诱导的肝组织过氧化损伤更具有保护作用且在50mg pro/mL时效果最强；能减少红细胞溶血的发生；(3)大米蛋白酶解物在体外试验中具有抗氧化活性，且在10-50mg pro/mL作用最佳。 四、大米蛋白酶解物对正常小鼠抗氧化功能的影响试验 选用纯昆明系小鼠60只，随机分为6组，分别为：正常对照组(C)，VitaminE组(VE)，大米蛋白酶解物低剂量组(RPH-1)，大米蛋白酶解物中剂量组(RPH-2)，大米蛋白酶解物高剂量组(RPH-3)，大米蛋白组(RP)。分别每天灌胃0.25mL/只生理盐水，10mg/mL VE，5.0，10.0和20.0mg/mL，大米蛋白酶解物以及未经酶解处理的大米蛋白，连续灌胃14天，处死小鼠，检测血浆、肝脏和肾脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果表明：不同剂量的大米蛋白酶解物均能显著增强小鼠血浆、肝脏和肾脏的抗氧化功能，而未酶解大米蛋白这种活性较弱。其中，大米蛋白酶解中剂量组(RPH-2)能显著提高小鼠血浆、肝脏和肾脏抗氧化酶活性(P<0.05)，并且能显著降低血浆、肝脏和肾脏的MDA浓度(P<0.05)，其抗氧化效果最为全面。VE能显著降低血浆、肝脏和肾脏组织MDA含量，提高肝脏CAT活性，提高血浆GSH-Px活性(P<0.05)；但对血浆SOD活性，肝脏和肾脏SOD和GSH-Px活性以及肾脏CAT活性均无显著影响(P>0.05)。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：本文部分缩写词的中英文对照

声明

第一部分文献综述

第一章自由基与抗氧化剂研究

一、自由基的产生、代谢及清除机制

二、非酶性抗氧化剂的研究及应用

第二章植物源抗氧化活性肽的研究进展

一、生物活性肽及抗氧化肽

二、大米蛋白抗氧化肽的开发与研究

参考文献

第二部分试验研究

第三章大米蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究

试验一大米蛋白抗氧化酶解条件的优化

试验二大米蛋白最佳抗氧化蛋白酶的筛选

试验三不同浓度RPHP清除自由基及抗脂质过氧化作用的研究

第四章大米蛋白酶解物对正常小鼠抗氧化功能的影响

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

参考文献

全文结论

致谢

附录

攻读学位期间发表的论文