芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂多残留免疫检测方法的建立与应用

摘要

本研究以苯酚、双光气和6-氨基正己酸为原料合成了半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸(HA);以3-甲基苯酚、双光气和3-氨基丙酸为原料合成了半抗原B-(间-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HB)。HA用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到通用免疫原HA-BSA,结合比为42:1;HA和HB用活泼酯法分别与卵清蛋白(OVA)偶联得到包被抗原HA-OVA和HB-OVA,结合比依次为23:1和17:1。 以芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂通用免疫原HA-BSA免疫BALB/c小鼠,经多次免疫后检测小鼠血清效价并选择效价较高的小鼠,应用杂交瘤技术,用PEG法将其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经ELISA法筛选及有限稀释法亚克隆化,建立可稳定分泌抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂的杂交瘤细胞株。结果获得了三株可稳定分泌抗芳香类氨基甲酸酯农药的杂交瘤细胞株(20-G8、3-E2和23-E5),所分泌的抗体均为IgM、κ型,亲和常数分别达2.15×108L/mol,1.43×108L/mol和8.04×107L/mol。其中细胞株20-G8所分泌的抗体对混灭威、灭除成、灭杀成、甲萘威等芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂具有明显的识别作用,为建立该类农药的多残留分析奠定了基础。 以成功制备的杂交瘤细胞株20-G8所分泌的抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂单克隆抗体为基础,通过对检测体系中盐离子强度、pH值、有机溶剂等影响因子的研究建立了混灭威、灭除威、灭杀威以及甲萘威的ELISA检测体系.以Logit(B/B0)作纵坐标与农药浓度的对数值作横坐标建立标准曲线,混灭威在0.001μg/L～100μg/L,范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9573x-0.3176,相关系数R2达0.9943,在自来水,土壤以及青菜中的添加回收率分别为101.6％、87.7％和90.4％；灭除威在0.001μg/L～100μg/L范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9185x-0.1698,相关系数R2达0.9954,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为108.8％、84.6％和92.2％；灭杀威在0.01μg/L～100μg/L范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9647x+0.0305,相关系数R2达0.9944,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为97.2％、84.2％和90.9％；甲萘威在0.01μg/ml～100μg/ml范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9094x-0.2513,相关系数R2达0.9955,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为101.6％、87.4％和94.5％。

目录

文摘

英文文摘

声明

上篇文献综述

第一章农药残留的现状与危害

1引言

2农药残留概述

3农药残留问题的主要危害

4国内外对农药残留的关注

第二章农药残留分析技术的发展动态

1引言

2仪器分析技术在农药残留检测中应用

3.生物学方法在农药残留检测的应用

第三章免疫检测技术在农药残留分析中的应用

1引言

2农药小分子的残留免疫分析

3农药残留免疫检测技术的新进展

下篇研究内容

第一节芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂通用抗原的合成与鉴定

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第二节芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂通用单克隆抗体细胞株的制备与筛选

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三节四种芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂间接竞争ELISA方法的建立

1实验材料与方法

2结果与分析

3讨论

全文总结

参考文献

附录

致谢