胚内注射雌马酚对肉鸡出雏后生长与肉质的影响及机理研究

摘要

本试验采用胚内注射的方式，研究雌马酚（Equol）处理鸡胚发育早期，对其出雏后生长与肉质的影响，并从抗氧化角度探讨其可能的作用机理；此外，采用原代细胞培养，进一步研究雌马酚对鸡肌细胞的保护作用，从而揭示其改善肌肉品质的机理。
　　 1胚内注射雌马酚对肉鸡出雏后生长与肉质的影响及机制探索
　　 选取三黄矮脚D种蛋孵化，孵化至第7胚龄时将胚随机分为3组，分别向蛋清内注射100μL白油乙醇混合溶剂（对照组，C）、0.2 m/mL（低剂量组，L）和1.0 mg/mL（高剂量组，H）雌马酚白油乙醇溶液。出雏后，记录肉鸡出雏重及每周龄体重，49日龄时宰杀并采集样品。结果表明，胚内注射低剂量雌马酚显著降低肉鸡的出雏重（p<0.05），但高、低剂量雌马酚处理对肉鸡1至7周龄体重均无显著影响（p>0.05）。低剂量雌马酚显著提高49日龄公鸡的腓肠肌重（p<0.05）；胚内注射雌马酚可显著增加公鸡的腹脂重（p<0.01），低剂量雌马酚处理显著增加母鸡的腹脂重（p<0.05），但对腹脂重与体重的比率均无显著影响（p>0.05）.此外，胚内注射雌马酚对子代鸡肝脏、总体脂、腿肌、胸肌、肝脏体重比，腓肠肌体重比以及腹脂宽度、胸肌面积等指标均无显著影响（p>0.05）.
　　 生化分析结果表明，高剂量雌马酚可显著降低母鸡血清中甘油三酯的含量（p<0.01），但对公鸡无显著影响。高、低剂量雌马酚均可显著升高母鸡血清中总胆固醇水平（p<0.05），血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量显著升高，增加血清中低密度脂蛋白胆固醇含量但未达到显著性水平（p>0.05）；高、低剂量雌马酚处理均可显著提高公鸡血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量（p<0.05），并增加血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量（P=0.086）。以上结果提示：胚内注射雌马酚改善鸡体内甘油三酯的代谢，但对胆固醇代谢具有一定的负面影响。
　　 肉质测定结果表明，高、低剂量雌马酚可显著降低49日龄母鸡肌肉红度值（p<0.01）；高剂量雌马酚可显著降低母鸡肌肉的黄度值（p<0.05）。然而，高、低剂量雌马酚对屠宰后肌肉pH45min值及剪切力均无显著影响（p>0.05）。对系水力的测定结果显示，高、低剂量雌马酚处理均可显著降低母鸡胸肌的蒸煮损失率（p<0.01），高剂量雌马酚能显著降低公鸡胸肌的蒸煮损失率（p<0.05）；高剂量雌马酚可显著降低母鸡胸肌的24 h和48 h的滴水损失率（p<0.05），但对公鸡无显著影响（p>0.05）。提示：雌马酚可改善肌细胞膜的完整性，从而增强其保守性能。
　　 ATPase染色法测定49日龄肉鸡腓肠肌不同类型肌纤维的横截面积及比例，结果显示：高剂量雌马酚可显著降低49日龄公鸡的肌纤维密度（p<0.05），低剂量雌马酚则有降低肌纤维密度的趋势（p=0.076<0.1）；高剂量雌马酚可显著降低49日龄母鸡Ⅰ型肌纤维的面积（p<0.05），但对公鸡Ⅰ型肌纤维的面积无显著影响（p>0.05）。
　　 对鸡血清和肌肉组织中抗氧化相关指标测定结果表明，高、低剂量雌马酚对母鸡血清中SOD活力及MDA含量均无显著影响（p>0.05），但低剂量雌马酚可显著增加血清中GSH-Px的活力（p<0.01），而高、低剂量雌马酚均可显著提高母鸡肌肉中SOD的活力（p<0.05），高剂量雌马酚使肌肉中GSH-Px的活力升高（p=0.059<0.1），但对肌肉中MDA的含量无影响（p>0.05）。
　　 2雌马酚对双氧水诱导鸡成肌细胞损伤的保护作用及机理研究
　　 由11胚龄三黄矮D鸡胚腿肌分离获得成肌细胞，用含有10％胎牛血清的完全培养基培养24小时后，将培养基换成含有1％ITS的完全培养基，稳定24小时后开始实验。采用1μM、10μM和100μM浓度的雌马酚预处理1小时后，再用一定剂量的双氧水损伤处理1小时，观察雌马酚对成肌细胞的保护作用并探索其作用机理。结果显示：10μM雌马酚单独处理对细胞活力无显著影响，1 mM双氧水损伤处理可以显著降低细胞的活力（p<0.05），1μM雌马酚预处理对双氧水诱导损伤成肌细胞活力的降低无显著抑制作用（p>0.05），而10μM和100μM雌马酚进一步降低双氧水诱导损伤下的成肌细胞活力（p<0.05）。
　　 生化分析测定结果表明，与对照组相比，10μM Eq单独处理对细胞上清液中MDA含量无显著影响（p>0.05），1 mM H2O2处理1小时后可显著增加MDA的含量（p<0.05）；而与H2O2处理组相比，1μM和100μM Eq预处理可以显著降低上清中MDA的含量（p<0.05）；10μM Eq预处理组上清液中MDA的含量降低但无显著性意义（p>0.05）。1 mM H2O2处理后成肌细胞上清中LDH的活力显著升高（p<0.05），1μM Eq预处理可降低H2O2升高LDH的活力作用，而10μM和100μM Eq预处理可进一步显著升高H2O2诱导损伤下成肌细胞上清中LDH活力（P<0.05）。对抗氧化酶SOD的测定结果表明，10μM Eq单独预处理对成肌细胞中SOD活力无显著影响（P>0.05），1 mM H2O2有降低SOD活力的趋势，而与H2O2组相比，1μM Eq预处理组细胞中SOD的活力显著增加（P<0.05），但10μM和100μM Eq预处理组细胞中SOD的活力有所提高，但未达到显著性水平。10μM Eq单独处理以及1 mM H2O2处理对成肌细胞中GSH-Px活力均无显著性影响（P>0.05），而与H2O2处理组相比，1μM和10μM Eq预处理可以提高成肌细胞中GSH-Px的活力且10μM Eq预处理达到显著水平（P<0.05），但100μM Eq对H2O2损伤导致的细胞GSH-Px活力的降低无显著影响（P>0.05）.
　　 单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）测定DNA的损伤程度结果显示，与对照组比较，10μM Eq单独处理显著降低彗星尾长（P<0.05），但对Olive尾矩、尾/头比、头％DNA和尾％DNA均无显著性影响（P>0.05）；1 mM H2O2处理可显著增加尾％DNA和显著降低头％DNA（P<0.05）；而与H2O2组相比，1、10和100μM Eq预处理均显著降低细胞Olive尾矩和尾％DNA（P<0.05），显著增加头％DNA（P<0.05），此外，10和100μM Eq预处理组彗星尾/头比显著降低，10μM Eq还可以显著降低细胞的彗星尾长（P<0.05）。
　　 相对定量实时荧光PCR方法检测不同处理组细胞中凋亡相关基因Bcl-2和BaxmRNA的表达丰度。结果表明，10μM Eq单独预处理不影响细胞中Bcl-2 mRNA的表达（P>0.05），H2O2处理下调细胞中Bcl-2的基因表达，但未显示显著性差异，而与H2O2处理组相比，Eq处理均可上调细胞中Bcl-2 mRNA的表达但未达到显著性差异。此外，以上处理条件对成肌细胞中Bax mRNA的表达均无显著影响（P>0.05）.Bax mRNA与Bcl-2 mRNA表达丰度的比值变化趋势与Bcl-2 mRNA表达变化趋势一致，但各处理组问无显著差异（P>0.05）。

目录

文摘

英文文摘

本文部分缩写的中英文对照

引 言

第一篇 文献综述

第一章 雌马酚的生物学作用概述

1 雌马酚的生物合成

2 雌马酚的生物活性作用

参考文献

第二章 植物雌激素对动物生长与肌肉品质的影响及机理

1 肌肉品质及影响因素

2 植物雌激素对动物生长与肉质的影响及机理

参考文献

第二篇 试验研究

第三章 胚内注射雌马酚对肉鸡出雏后生长与肉质的影响及机制探索

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

参考文献

第四章 雌马酚对双氧水诱导鸡成肌细胞损伤的保护作用及机理研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

参考文献

全文结论

致 谢