农药对多花黑麦草青贮微生物多样性影响的初步研究

摘要

农药残留已成为秸秆青贮利用中潜在的安全问题之一，田间使用农药不可避免的残留于作物中，进而可能对农作物秸秆青贮利用产生一定的影响。目前，从农药残留对秸秆青贮发酵体系中的微生物的生物量、结构及遗传多样性等影响方面的研究，报道甚少。
　　本试验以多花黑麦草为材料，设置处理一和处理二两个农药组合，分别喷施玉米、水稻用农药种类，参照不同农药推荐使用量与实际生产中的使用量，每个处理组设置空白对照（CK，不施农药）以及正常最低喷施量的1.0倍、1.5倍和2.0倍四个浓度处理，采用微生物培养和PCR-DGGE分子技术，研究农药对原料附着微生物和青贮发酵体系中微生物数量、多样性及动态变化的影响。主要研究结果如下:
　　1.两个农药处理组多花黑麦草表面附着细菌、霉菌和酵母菌菌群作用随时间变化呈现:抑制——恢复——增长的趋势，其中农药浓度越高，对菌群抑制作用时间越长。各处理对细菌、霉菌和酵母菌的抑制强度不同，其中1.0倍和1.5倍农药处理下，随着农药浓度的增大，对细菌的抑制作用增强，而2.0倍农药处理介于二者之间;霉菌和酵母菌菌落数量在1.5倍和2.0倍农药处理下抑制作用较强;在大田条件下多花黑麦草植株附着乳酸菌数量较少。处理组多花黑麦草青贮样附着乳酸菌菌落数量显著低于对照CK(P＜0.05)，1.5倍农药处理细菌数量降低显著(P＜0.05）。处理一霉菌与酵母菌数量显著低于对照CK，而各农药处理之间差异不显著(P＞0.05）;处理二仅在1.0倍农药处理下霉菌和酵母菌数量显著(P＜0.05)显著低于对照CK。
　　2.两个农药处理组对多花黑麦草青贮pH值和微生物数量产生不同的影响。农药处理抑制多花黑麦草青贮过程pH值的下降。乳酸菌、细菌、霉菌和酵母菌菌群数量，随着农药浓度的增大而变化，其中青贮过程中农药处理组乳酸菌数量低于对照CK，而细菌、霉菌和酵母菌菌落数量在对照CK之间上下波动。.
　　3.两个农药处理组对多花黑麦草青贮乳酸菌和细菌多样性产生不同的影响。两个农药处理组青贮乳酸菌菌群变化一致，农药处理对乳酸菌菌群遗传多样性影响较大，不同浓度农药处理对多花黑麦草青贮发酵体系中乳酸菌菌群多样性影响不同，随着青贮发酵时间的延长，各农药处理与对照CK之间的相似性增大，其中以2.0倍农药处理对乳酸菌菌群多样性影响较大。而不同农药处理组对青贮细菌菌群多样性影响效果不同，其中处理一细菌菌群的相似性达0.55，而处理二细菌菌群相似性仅为0.42。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献综述

1 秸秆资源及其综合利用概况

1．1 秸秆资源的概况

2 秸秆青贮利用

2．1 秸秆青贮原理

2．2 秸秆青贮研究现状

2．3 农药使用对环境微生物多样性的影响

2．4 青贮微生物多样性研究技术

3 本试验研究目的和内容

3．1 研究目的

3．2 研究内容

3．3 研究技术路线

第二章 不同农药组合对多花黑麦草附着微生物及青贮微生物的影响

1 试验材料与方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

1．3 主要仪器与试剂

1．4 测定指标及方法

1．5 数据分析

2 结果与分析

2．1 不同农药组合对多花黑麦草表面附着微生物菌群种类和数量的影响

2．2 不同农药组合对多花黑麦草青贮发酵体系微生物的影响

3 讨论

3．1 农药处理对多花黑麦草自身附着微生物种类和数量的影响

3．2 农药处理对多花黑麦草青贮微生物菌落数量的动态影响

4 总结

第三章 不同农药组合对多花黑麦草青贮微生物多样性的影响

1 材料和方法

1．1 试验材料

1．2 试验仪器和试剂

1．3 主要试剂的配置方法

1．4 样品的前期处理

1．5 青贮微生物总DNA提取方法比较

1．6 利用PCR-DGGE对不同处理材料青贮乳酸菌和细菌多样性分析

2 结果分析

2．1 青贮微生物总DNA提取与引物扩增结果

2．2 不同农药处理组对多花黑麦草青贮乳酸菌多样性的影响

2．3 不同农药处理组对多花黑麦草青贮细菌多样性的影响

3 讨论

4 总结

第四章 全文结论

参考文献

致谢