建鲤、荷包红鲤IMF、脂肪酸组成差异以及Apos基因转录水平与C18：1的相关性分析

摘要

本文测定了同池混养的1龄建鲤(Cyprinus carpio var.jian)、荷包红鲤(Cyprinuscarpio var.wuyuanensis)背部肌肉的脂肪含量(intramuscular fat, IMF)和脂肪酸组成，比较发现，两品种鲤鱼肌肉脂肪存在较大差异。建鲤肌肉IMF含量(2.28％)显著低于荷包红鲤(3.56％)（P＜0.01）;建鲤肌肉除了单不饱和脂肪酸(MUFA)(19.97±3.10％)含量低于荷包红鲤(28.20-3.98％)(P＜0.01)外，饱和脂肪酸(SFA)(26.99±1.40％)、多不饱和脂肪酸(PUFA)(48.94±1.88％)均高于荷包红鲤(P＜0.01)，特别是DHA+EPA。相关性分析显示，鲤鱼MUFA中的C18∶1分别与IMF、DHA呈正相关(R2=0.61)和负相关(R2=0.73)关系，回归关系均显著（P＜0.01）。
　　载脂蛋白(apolipoprotein，Apo)是血浆脂蛋白的重要组成部分，在脂质的摄取、转运以及脂肪代谢调节过程中具有重要作用，本实验分离了鲤鱼的六条Apos基因序列，通过序列结构和同源性分析发现，所得的序列分别隶属于载脂蛋白家族中的Apo-A-Ib、Apo-A-Ⅳ、Apo-C-Ⅰ，记为CcApo-A-Ib1、CcApo-A-Ib2、CcApo-A-Ⅳ1、CcApo-A-Ⅳ2、CcApo-C-Ia、CcApo-C-Ib。这些基因的共同结构特点是均由3个内含子和4个外显子组成，内含子序列差异明显，各基因编码的氨基酸序列与对应的斑马鱼的氨基酸序列相似度在80％左右(CcApo-A-Ⅳ2除外)。系统进化树显示，六条Apos序列分别属于Apo-C族和Apo-A族两大支，CcApo-C-Is聚集在Apo-C族，CcApo-A-Ibs、CcApo-A-Ⅳs与A族载脂蛋白聚集在一起，但Apo-A-Ⅰ与Apo-A-Ⅳ两家族序列分支不明显，置信度不高。不同纲动物的Apos间的遗传距离与分类地位基本一致，进化树很好地显示了鱼纲、两栖纲、鸟纲和哺乳纲，但是不能反映科、目水平的系统进化。
　　利用实时荧光定量PCR检测了CcApo-A-Ibs、CcApo-C-Is、CcApo-A-Ⅳ1和CcApo-A-Ⅳ2在建鲤和荷包红鲤不同组织、器官的表达情况。结果显示，各基因在两个品种鲤鱼的组织表达分布情况基本一致，肝脏的表达水平最高，是这三组基因的主要表达器官。此外，CcApo-C-Is在脑、精巢，CcApo-A-Ⅳ1、2在小肠，CcApo-A-Ibs在脑组织也有较高水平的表达。荷包红鲤肝脏CcApo-C-Is的表达水平显著高于建鲤（P＜0.05），是建鲤的1.5倍，而CcApo-A-Ⅳ1和2均却显著低于建鲤(P＜0.05），CcApo-A-Ibs的表达差异不显著（P＞0.05）;肌肉组织中，荷包红鲤的三组Apos基因的表达水平均高于建鲤，但只有CcApo-A-Ⅳ2差异显著(P＜0.01)，其它差异均不显著（P＞0.05）。通过对肝脏CcApo-C-Is、CcApo-A-Ⅳ1、2表达水平与肌肉中的C18∶1进行相关性分析发现，回归关系均显著(P＜0.01)，但相关系数不高(R2:0.40～0.52)，结合Apo-C-Ⅰ、Apo-A-Ⅳ的生物学功能，推测荷包红鲤肝脏CcApo-C-Is的高表达以及CcApo-A-Ⅳ1、2的低表达与其肌肉IMF、C18∶1含量相对较高有关，可作为筛选相关分子标记的目标片段。

目录

声明

摘要

缩写说明

第一章 文献综述

1 前言

2 鱼类脂肪酸研究进展

2．1 鱼类脂肪酸的营养价值

2．2 鱼类多不饱和脂肪酸的生物合成及影响因素

2．3 IMF及脂肪酸对鱼类肉质的影响

3 鱼类脂肪代谢与调控研究进展

3．1 鱼类体脂沉积的影响因素

3．2 鱼类脂肪代谢的特点

3．3 鱼类的脂肪转运机制

4 相关载脂蛋白的研究现状

4．1 载脂蛋白AⅠ的分子生物学研究进展

4．2 载脂蛋白AⅣ的分子生物学研究进展

4．3 载脂蛋白CⅠ的分子生物学研究进展

5 本研究的目的与意义

第二章 建鲤与荷包红鲤IMF以及肌肉脂肪酸组成的比较

1 实验材料

1．1 实验鱼

1．2 样品采集

1．3 血液生化指标的测定

1．4 肌肉粗脂肪、脂肪酸的测定

1．5 统计分析

2 结果

2．1 建鲤与荷包红鲤肌肉含水量、粗脂肪及脂肪酸组成

2．2 建鲤、荷包红鲤部分血浆生化指标比较

2．3 油酸(C18：1)与m伍含量及DHA(C22：6n-3)的关系

3 讨论

3．1 鲤鱼肌肉总脂含量及部分血液指标的比较

3．2 鲤鱼IMF脂肪酸组成的比较

3．3 油酸(C18：1)与IMF、脂肪酸的关系

第三章 鲤鱼三种Apo基因的克隆与序列分析

1 材料和方法

1．1 样品采集

1．2 实验试剂与仪器

1．3 总RNA和基因组DNA抽提

1．4 Apo基因的克隆

1．5 序列分析

2 结果

2．1 鲤鱼Apo基因序列

2．2 遗传进化分析

第四章 鲤鱼三种Apo基因的表达水平以及与肌肉脂肪酸C18：1的相关性分析

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 实验试剂与仪器

1．3 总RNA提取

1．4 半定量RT-PCR检测表达水平

1．5 统计分析

2 结果与分析

2．1 鲤鱼Apos mRNA在器官中的分布

2．2 Apo基因在建鲤、红鲤肝脏和肌肉的表达比较

2．3 鲤鱼肝脏CcApo-C-Is、CcApo-A-Ⅳs的表达水平与C18：1的关系

3 讨论

全文结论

参考文献

附录

致谢

科研情况