DNA条形码试剂盒在疫霉属和腥黑粉菌属检测中的应用及风险分析

摘要

疫霉属(Phytophthora sp.)和腥黑粉菌属(Tilletia sp.)是日常检疫工作中的重点关注对象，疫霉属是包括大豆、马铃薯等在内多种作物的病原真菌，严重危害寄主植物的生长;腥黑粉菌属主要危害小麦等禾本科作物，造成严重的经济损失。本文通过对这两个属内较为重要的病原菌进行风险分析，旨在进一步了解进境植物携带疫霉属和腥黑粉菌属病原真菌的情况及其传入风险，明确该属下病原真菌的风险等级，并提出相应的风险管理措施，为今后更好的开展检验检疫工作提供参考。根据风险分析结果得出，疫霉属中有7种高风险检疫性有害生物，分别为:栗黑水疫霉(P.cambivora)、马铃薯疫霉绯腐病菌(P.erythroseptica)、大豆疫霉（P.sojae）、丁香疫霉（P.syringae）、冬生疫霉（P.hibernalis）、苜蓿疫霉（P.medicaginis)、多枝疫霉（P.ramorum）;腥黑粉菌属中有3种高风险检疫性有害生物，分别为:小麦印度腥黑粉菌（T.indica）、小麦矮腥黑粉菌（T.controversa）、黑麦草腥黑粉菌（T.walkeri）。建议在进境植物检疫过程中应重点予以关注，特别是T.walkeri目前尚未列入我国进境植物检疫性有害生物名录，但通过风险分析我们得出，该病原菌的进入风险较高，定殖扩散可能性大，且经济危害严重，因此建议将其增列为我国进境植物检疫性有害生物。
　　鉴于疫霉属和腥黑粉菌属的病原真菌存在种间形态极为类似，对检疫人员经验要求较高的特点，本文对上述2个属较为重要的病原种进行了基因条码检测技术的研究。DNA条形码试剂盒具有操作简便、结果可靠、不依赖检疫人员的经验技术等优点，同时可以实现对近似种的有效区分。本研究中，我们尝试将DNA条形码试剂盒技术用于疫霉属和腥黑粉菌属的检测，通过自行研发的疫霉属DNA条形码试剂盒（疫霉属基因条码检测网站,http://58.211.92.14:8080/myapp）、腥黑粉菌属DNA条形码试剂盒（植物有害生物检疫鉴定系统，http://58.211.92.14/sysinspect/kj.aspx）实现对这两个属内病原真菌的快速、准确的鉴定，有效解决对于实际工作中难以鉴定到种的问题。试剂盒以网站形式呈现，方便使用者的实际应用。实验结果表明，疫霉属基因条码试剂盒主要涉及疫霉属真菌的ITS、28S、60S、COX2四个基因片段，并相对应有用于疫霉属真菌DNA扩增的引物、PCR反应体系和条件。通过我们自行研发的分析软件，共找到特异性碱基位点238个，其中ITS片段86个，分属8个种;60S片段42个，分属13个种;28S片段44个，分属12个种;COX2片段66个，分属13个种。除掘氏疫霉（P.drechsleri）外，其它种均能找到不同数量的特异性碱基位点，可以基本实现对疫霉属中重要种的有效区分和鉴定。腥黑粉菌属DNA条形码试剂盒由于基因序列有限，目前主要尝试了ITS片段，通过自行研发的分析软件，共找到67个特异性碱基位点，包含6个种。通过条形码试剂盒仅可实现对部分种的区分，建议随着研究的不断发展，可以尝试在其他基因片段上寻找更多的标记碱基，进一步完善该属的条形码试剂盒。

目录

声明

摘要

前言

上篇 文献综述

第一章 疫霉属概述

1．1 疫霉属介绍

1．2 疫霉属有害生物截获情况

1．3 疫霉属真菌检测技术研究进展

第二章 腥黑粉菌属概述

2．1 腥黑粉菌属介绍

2．2 腥黑粉菌属有害生物截获情况统计

2．3 腥黑粉菌属真菌检测技术研究进展

第三章 DNA条形码技术

3．1 DNA条形码技术原理

3．2 DNA条形码的标准

3．3 DNA条形码技术的优缺点

3．4 DNA条形码技术在不同生物中的研究进展

下篇 研究内容

第一章 疫霉属病原真菌风险分析

1．1 疫霉属主要病原真菌

1．2 有害生物风险评估

1．3 确定潜在检疫性病原生物等级

第二章 腥黑粉菌属病原真菌风险分析

2．1 腥黑粉菌属主要病原真菌

2．2 有害生物风险评估

2．3 确定潜在检疫性病原生物等级

第三章 疫霉属真菌DNA条形码试剂盒研究

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．3 结果与分析

3．4 小结与讨论

第四章 腥黑粉菌属真菌DNA条形码试剂盒研究

4．1 前言

4．2 材料与方法

4．3 结果与分析

4．4 小结与讨论

第五章 全文总结与讨论

5．1 结论

6．2 讨论

参考文献

致谢