Effects of Epimedium and Its Active Ingredients on Female Mouse Reproductive Development

摘要

传统医学非常重要，但它在人类健康和动物保健方面的作用常被人们低估。传统医学在兽医临床的应用有着悠久的历史，它经常用来促进维持机体健康，预防和治疗疾病，尤其用于治疗慢性疾病。在传统中药中，淫羊藿作为一种传统的草药，与其活性成分很久就被用于治疗药物，如心血管疾病治疗和促进发情等，但至今仍未有淫羊藿及其活性成分如何影响雌性小鼠生殖发育的报道。
　　小鼠卵巢是产生卵母细胞的场所，每个卵泡内含有1个卵母细胞。卵泡生长的启动是卵泡发育的重要调控点。卵泡在出生前就已形成此时处于静止状态，原始卵泡阶段:原始卵泡进入生长卵泡池后，便会形成连续不断的卵泡波，直至达到排卵前期的格拉芙氏卵泡阶段。卵泡发育需经过初级卵泡、次级卵泡、腔前卵泡和有腔卵泡阶段。在发生受精时，只有经过充分竞争发育的排卵前卵泡卵母细胞才能支撑胚胎发育至终期。因此，本试验通过检测小鼠体重、卵母细胞体外成熟率(in vitromaturation，IVM)、生殖器官指数和卵巢、子宫组织学形态，评价淫羊藿（epimedium，EP）及淫羊藿多糖（Epimedium polysaccharide，EPS）和淫羊藿苷（icariin，ICA）对小鼠生长和生殖发育的影响。
　　180只健康雌性昆明小鼠随机分为30组，每组6只，分别连续7d和14d灌服2、6、10和14 mg/0.1 mL EP，2、4、6和8 mg/0.1 mL EPS，或0.1、0.3、0.5和0.7mg/0.1 mL ICA，每个对照组均在相同时间灌服0.1 mL生理盐水。所有小鼠在清洁级条件下常规饲养，自由采食与饮水。连续灌服7d或14d后，致死小鼠，取生殖器官（子宫、输卵管和卵巢）并去除脂肪组织，称量生殖器官重计算生殖器官指数（reproductive index，RI）;部分卵巢用于卵母细胞采集及体外成熟培养(IVM)，其余卵巢用于组织形态学分析。本试验为了解淫羊藿及其活性成分如何影响小鼠卵母细胞生长发育提供了基础材料，并确定3种药物的最佳作用剂量。试验结果如下:
　　试验一、淫羊藿对小鼠卵巢和子宫发育的影响
　　生殖器管指数(RI)分析表明，连续7d灌服10 mg/0.1 mL EP组和连续14d灌服6 mg/0.1 mL组小鼠RI值显著高于其他EP处理组和对照组。此外，所有7d和14d EP处理组的RI值均显着高于对照组。EP处理组卵母细胞体外成熟培养后，pbI排出率均高于对照组(63.30％)，但试验组间差异不显著(p＜0.05)。7d和14 d EP处理组中，6 mg/0.1 mL组的pbI排出率最高。卵巢组织学观察发现，各试验组间有腔卵泡的数量和大小差异不显著，但所有EP处理组卵巢组织内均有大量次级卵泡，说明EP可以促进卵泡发育。
　　试验二、淫羊藿多糖对小鼠卵巢和子宫发育的作用
　　连续7d和14 d给予不同剂量的EPS，对小鼠体重并无负面影响;EPS处理可增加小鼠体重。14 d EP处理组中，4 mg/0.1 mL组RI显著高于其他EPS组与对照组。卵母细胞体外成熟培养，结果发现所有EPS处理组卵母细胞pbI排出率均高于对照组，但各试验组间差异不显著(p＜0.05)。7 d EPS处理组中，8 mg/0.1 mL组pbI排出率最高，14 d EP处理组中，4 mg/0.1 mL组pbI排出率最高。卵巢组织学观察发现，EPS处理组卵巢组织内次级卵泡数量增加，说明EPS与EP一样，可以促进卵泡发育。
　　试验三、淫羊藿苷对小鼠卵巢和子宫发育的影响
　　ICA7d和14 d各剂量组对小鼠体重也未发现有负面影响。正如EP和EPS试验一样，ICA处理可增加小鼠体重。在14 d处理组中，0.1、0.3、0.5和0.7 mg/0.1 mLICA组RI值要显著高于对照组。此外，所有ICA7 d和14d处理组的RI值均显著高于对照组。卵母细胞体外成熟培养发现，所有EPS处理组卵母细胞pbI排出率均高于对照组，但试验组间差异不显著(p＜0.05)。7 d EPS处理组中，8 mg/0.1 mL组pbI排出率最高;14 d EP处理组中，4 mg/0.1 mL组pbI排出率最高。卵巢组织学观察发现，各ICA处理卵巢组织形态未见明显差异，但卵巢内次级卵泡数量多于对照组，说明ICA可促进卵泡的发育。
　　这些数据表明，一定剂量的EP、EPS和ICA均能促进小鼠卵巢发育;根据IVM和RI值综合分析，在3种药物中ICA促进小鼠卵巢和子宫发育的效果最佳。

目录

声明

CONTENTS

LIST OF TABLES

LIST OF FIGURES

摘要

ABSTRACT

LIST OF ABBREVIATIONS

CHAPTER 1．HERBAL MEDICINE USAGE IN THERAPEUTICS

1 Overview of herbal medicine usage in therapeutics

1．1 Herbal medicine usage in China and Asia

1．2 Herbal medicine usage in Africa

1．3 Herbal medicine usage in the rest of the world

2 The future of herbal medicine in health care delivery

CHAPTER 2．HERBAL EPIMEDIUM AND REPRODUCTIVE DEVELOPMENT

1．2 BotanicaI description and species

1．3 Ethnopharmacological，traditional and current uses

1．4 Chemical composition of herbal Epimedium

1．5 Processing and quality control methods

1．6 Estrogen-like activity of herbal Epimedium

1．7 Other pharmacological action of herbal Epimedium

1．8 Side effects and acute toxicity of herbal Epimedium

2 Basic biology of the mouse ovary and the regulation of reproduction

3 Ovarian follicle development and oocyte maturation

4 Objectives

CHAPTER 3．EFFECTS OF EPIMEDIUM ON MOUSE OVARYAND UTERUS DEVELOPMENT

1 Materials and methods

1．1 Animals

1．2 Reagents

1．4 EP medicine，fixatives and tissue culture media preparations

1．5 The main instruments and equipment

2 Experimental design and work

2．1 Ovarian tissue preparation

2．3 Oocyte culture in vitro

2．4 Determination of reproductive index (RI)

2．5 Preparation of histological sections of mice ovaries

2．6 Statistical analysis

3 Results

3．1 Effects of EP on body weight of mice

3．2 Effects of EP on reproductive index

3．3 Oocyte culture evaluation

3．4 Histological evaluation

4 Discussion

CHAPTER 4．EFFECTS OF EPS ON MOUSE OVARY AND UTERUS DEVELOPMENT

1 Materials and methods

1．1 Animals

1．2 Reagents

1．3 EPS medicine，fixatives and tissue culture media preparations

1．4 The main instruments and equipment

2 Experimental design

2．1 Ovarian tissue preparation

2．2 Oocyte culture in vitro

2．3 Determination of reproductive index (RI)

2．4 Preparation of histological sections of mice ovaries

2．5 Statistical analysis

3 Results

3．1 Effects of EPS on body weight of mice

3．3 Oocyte culture evaluation

3．4 Histological evaluation

4 Discussion

CHAPTER 5．EFFECTS OF ICA ON MOUSE OVARY AND UTERUS DEVELOPMENT

1 Materials and methods

1．1 Animals

1．2 Reagents

1．3 ICA medicine，fixatives and tissue culture media preparations

1．4 The main instruments and equipment

2 Experimental design

2．1 Ovarian tissue preparation

2．2 Oocyte culture in vitro

2．3 Determination of reproductive index (RI)

2．4 Preparation of histological sections of mice ovaries

2．5 Statistical analysis

3 Results

3．1 Effects of ICA on body weight of mice

3．2 Effects of ICA on reproductive index

3．3 Ooeyte culture evaluation

3．4 Histological evaluation

4 Discussion

SUMMARY AND CONCLUSION

REFERENCES

ACKNOWLEDGEMENT

DEDICATION