黑果枸杞花色苷分离纯化、结构鉴定及生物活性研究

摘要

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科(Solanceae)枸杞属(Lycium L.)多年生灌木，主要分布在我国宁夏、新疆、西藏、青海、内蒙、甘肃等盐碱地、干旱地，属于典型的荒漠植物。其早期作为一种藏药收载于《本草晶珠》、《四部医典》等藏医药著作中，用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经、高血压、内分泌失调等病症。现代科学研究表明黑杲枸杞果实含花色苷、生物碱、多糖、必需脂肪酸、氨基酸、维生素C、生育酚等营养物质及活性成分，具有抗氧化，神经保护，抑菌消炎，降血糖，预防心血管疾病等生物活性。 黑果枸杞与传统红枸杞相比含有更丰富的花色苷类活性物质，近几年成为了研究者关注的热点。目前对黑果枸杞花色苷的研究还比较有限，因此本文主要从黑果枸杞花色苷的提取工艺优化、稳定性、分离纯化、结构鉴定、抗氧化及免疫活性方面对其进行了较为系统的研究。主要研究总结如下: 1.黑果枸杞花色苷的提取工艺优化和稳定性研无选择液料比、提取时间、乙醇浓度及提取温度4个因素进行单因素实验，确定RMS实验因素中心点。对实验数据进行回归分析，得到黑果枸杞花色苷的最优提取工艺为:液料比40mL/g、提取时间3.07h、乙醇浓度71.36％。考虑到实验操作的便利性，将最优提取条件修正为:液料比40mL/g、提取时间3.0h、乙醇浓度70％、提取温度45℃。对黑果枸杞花色苷稳定的研究表明:酸性条件、避光避热、溶液中含有Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+金属离子及葡萄糖能保护黑果枸杞花色苷的稳定性。 2.黑果枸杞花色苷的分离纯化及结构鉴定.本研究通过AB-8大孔树脂吸附解吸附，AKTA半制备型色谱分离纯化获得纯度较高(97％)的组分1，通过pH示差法并以C3G为标准品测量了1组分的花色苷含量为845.6+43.9mg C3G/100g DW。通过HPLC、HPLC-MS、NMR等检测方法对黑果枸杞花色苷纯化组分1进行了结构解析，结合质谱核磁实验数据和相关文献报道最终将组分1鉴定为矮牵牛素3-O-芸香糖（反式-香豆酰基）-5-O-葡萄糖苷。 3.黑果枸杞花色苷的生物活性研究.通过体外抗氧化化学实验验证黑果枸杞花色苷及纯化物1有较强的DPPH、超氧根阴离子、ABTS自由基清除能力及一定的总抗氧化能力。采用PC12大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化神经细胞模型证明化合物1在一定浓度范围内可以抑制H2O2诱导产生的自由基对神经细胞的氧化损伤，保护细胞膜完整性，减少LDH分泌，降低PC12由于细胞脂质过氧化反应而产生的MDA含量，增强SOD、CAT、GSH-Px细胞抗氧化酶活性，抑制细胞凋亡。通过建立小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)模型，研究发现黑果枸杞花色苷1对RAW264.7细胞具有免疫活性的调节作用:能显著提升RAW264.7细胞增殖能力，促进细胞中性红吞噬能力，提高细胞体内酸性磷酸酶(ASP)活性，刺激细胞体内免疫调节的NO分泌量。

目录

声明

摘要

第一章文献综述

1黑果枸杞概述

1．1黑果枸杞的主要活性成分

2．1抗氧化

2．2心血管类疾病预防和治疗作用

2．3抗炎症及免疫作用

2．4降血糖抗疲劳

3花色苷的研究进展

3．1花色苷的提取

3．2花色苷的分离纯化

3．3花色苷的结构解析

3．4花色苷的稳定性研究

3．5花色苷的生物活性研究

4．1立题依据及意义

4．2主要研究内容

第二章黑果枸杞中花色苷提取工艺及稳定性研究

1实验材料及仪器

1．1实验原料及试剂

1．2实验设备

2实验方法

2．1花色苷的提取

2．2单因素实验设计

2．3响应曲面实验设计

2．4黑果枸杞花色苷稳定性

3．结果与讨论

3．1黑果枸杞花色苷的提取优化

3．2黑果枸杞花色苷的稳定性研究

4．本章小结

参考文献

第三章黑果枸杞花色苷的分离纯化及结构鉴定

1实验材料及仪器

1．1实验原料及试剂

1．2实验设备

1．3实验方法

2结果与分析

2．1总花色苷含量

2．2组分1的分离及纯化

3本章小结

1．黑果枸杞花色苷的纯化

2．花色苷1的结构解析

参考文献

第四章黑果枸杞花色苷的生物活性

1实验材料及仪器

1．1实验原料及试剂

1．2实验设备

2实验方法

2．1 DPPH自由基清除力

2．2超氧根阴离子自由基清除力

2．3 ABTS自由基清除力

2．4铁离子还原力(FRAP)

2．5抑制H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的作用

2．6黑果枸杞花色苷免疫调节能力

3结果与分析

3．1 DPPH自由基清除力

3．2超氧根阴离子自由基清除力

3．3 ABTS自由基的清除力

3．4铁离子还原力(FRAP)

3．5抑制H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的作用

3．6黑果枸杞花色苷免疫调节能力

4本章小结

参考文献

全文结论与展望

1结论

1．黑果枸杞花色苷的提取工艺优化和稳定性研究

2．黑果枸杞花色苷的分离纯化及结构鉴定

3．黑果枸杞花色苷的生物活性研究

2展望

致谢

硕士期间发表论文情况