两株新城疫病毒诱导宿主获得性免疫及天然免疫的差异比较

摘要

本研究在对实验室保存的一新城疫毒株进行鉴定及生物学特性研究的基础上，将其与新城疫Lasota标准毒株对比，探讨两个毒株在诱导宿主获得性免疫及天然免疫方面的差异。结果如下: 1.新城疫Lasota.P2M1毒株生物学特性分析 为探讨一株血凝价明显高于标准新城疫Lasota毒株的Lasota毒株克隆(命名为Lasota.P2M1)的纯净性及部分生物学特性，本研究用RT-PCR方法排除病毒液中其他常见禽类病毒（尤其是具有血凝特性病毒）的存在;用电子显微镜观察病毒粒子结构;提取RNA，进行全基因组测序并与公布的标准毒株序列进行比较。结果发现:该新城疫病毒均质单一，不含其它常见禽类病毒;病毒粒子呈球形，大小约为200-300nm，有囊膜，囊膜上有纤突，在形态学上符合新城疫病毒特征;与标准Lasota毒株相比，在P蛋白上存在E80G、L327I两个氨基酸突变，在M蛋白上存在一个T124A突变。结果表明:该病毒虽然生物学特性有一定的变化，但从结构及进化上属于典型的新城疫病毒，基因突变可能是其毒株血凝价升高的原因。 2两株新城疫Lasota毒株引起宿主获得性免疫反应的差异比较 为探讨两株生物学特性不同的新城疫Lasota毒株(标准Lasota毒株;突变株Lasota.P2M1)引起宿主获得性免疫反应的差异，本研究用标准Lasota毒株和Lasota.P2M1分别免疫1周龄SPF鸡，免疫后2周用新城疫病毒强毒株（北京F48E9株）对鸡群攻毒并检测不同毒株免疫及攻毒后的存活率、体内的抗体水平、内脏器官的含毒量及口咽部和泄殖腔的排毒量。结果显示:Lasota.P2M1免疫的鸡群在攻毒后，存活率(60％)显著高于标准Lasota毒株免疫的鸡群(40％)，并能产生更高水平的IgG、SIgA、新城疫病毒特异性血凝抑制(HI)抗体和中和抗体;同时鸡群内脏中病毒含量较低，口咽部与泄殖腔检测到的病毒量降低更为明显。结果表明:与标准Lasota相比，Lasota.P2M1对鸡群具有更好的免疫保护作用，能诱导更高的新城疫病毒特异性抗体水平以及更强体液免疫和黏膜免疫反应，这可能是由于其基因组中的氨基酸突变导致，这种免疫学特性的变化或许能够在新城疫的疫苗开发中得到应用。3两株新城疫Lasota毒株对宿主天然免疫反应的差异比较 为探讨两株不同生物学特性的新城疫Lasota毒株(标准Lasota毒株;突变株Lasota.P2M1)引起宿主天然免疫反应的差异，本研究将两种病毒分别感染鸡胚成纤维细胞（DF-1），Real-time PCR及Westem blot检测TLR3、TLR7、MDA5等受体的mRNA及蛋白表达，ELISA及免疫荧光检测核转录因子IRF3的含量及其磷酸化水平，蛋白芯片检测40种细胞因子的分泌水平并用ELISA验证部分与炎症、抗病毒等相关的细胞因子在细胞上清中的含量差异。结果显示，标准Lasota毒株感染细胞后，诱导产生的TLR3、TLR7、MDA5的mRNA及蛋白含量显著高于突变株Lasota.P2M1(P＜0.05)。Lasota感染细胞后12小时，IRF3及其磷酸化水平、细胞上清中大部分细胞因子(31/40)的表达高于Lasota.P2M1感染组。结果说明，两种毒株在诱导DF-1细胞的天然免疫反应方面存在差异，这可能是Lasota.P2M1在鸡胚中更容易增殖的原因。

目录

声明

摘要

本文部分缩写中英文对照

引言

第一篇文献综述

第一章新城疫及新城疫病毒的研究进展

1 致病性

2临床症状和病理变化

3病毒结构

4病毒分型

5病毒基因组

6流行病学

7防治措施

第二章新城疫疫苗的研究进展

1 弱毒疫苗

2灭活疫苗

3基因工程疫苗

第三章抗病毒天然免疫应答的研究进展

1天然免疫概述

2模式识别受体(pattern-recognition receptors，PRRs)

3 Ⅰ型干扰素(Interferon，IFN)调控机制

第二篇试验研究

第一章新城疫Lasota．P2M1毒株生物学特性分析

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

参考文献

第二章两株新城疫Lasota毒株诱导宿主获得性免疫反应的差异比较

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

参考文献

第三章两株新城疫Lasota毒株诱导宿主天然免疫反应的差异比较

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

4小结

参考文献

总体讨论

全文结论

本文创新点

附录

致谢