欧洲森林草莓快繁体系建立及离体再生适宜类型筛选

摘要

草莓(Fragaria ananassa Duch)属于蔷薇科(Rosaccae)草莓属QFragaria)，草本，匍匐植物。原产南美洲，现世界各地广泛种植，是世界上最重要的经济浆果。传统育种方法周期长、难度大。分子育种的兴起为草莓育种提供了新的解决方案。草莓转基因最常用的方法是农杆菌转化法，农杆菌转化法需要构建高效的草莓愈伤及再分化体系。而组织培养的污染，愈伤组织生长速度慢，再分化能力弱，试验周期长，一直是影响转基因操作的重要问题。寻找污染原因进一步降低污染问题，筛选脱分化再分化能力强的草莓品种，构建高效草莓愈伤不定芽体系，缩短试验周期，就具有非常重要的意义。 主要研究结果如下: 1.筛选出NOR156,NOR164,NOR1,NOR118,NOR147,ES8,ES6,ES12,LIT1，LIT7，FIN53，SL01，IT18，IT20，IT1，IT6，共16个相对生长速度快的草莓类型。 2.探究了组织培养污染原因通过对397个培养基污染进行详细观测，总结污染产生的规律，发现外植体离体时间与外植体本身的健康程度会很大程度影响污染率和消毒效率。选择相对健壮的外植体，缩短离体时间，减少外植体水分流失，减少试验操作以及消毒过程中外植体损伤，减少伤口的数量可以有效降低污染率。消毒剂的浓度也应与外植体的健壮程度相关，并试验出本次试验所采取的高效消毒法:流水冲洗1h，无菌水冲洗一次，2％的次氯酸钠溶液消毒3min，次氯酸钠消毒后，用无菌水冲洗3遍，40％的PPM溶液浸泡30s。 3.通过对栽培过程中组培苗与扦插苗生长速度形态学上的差异，试验组培苗叶片、组培苗叶柄、扦插苗叶片、扦插苗叶柄之间的愈伤生长能力以及不定芽的再生能力不同。发现消毒后的扦插苗叶柄具有一定的不定芽产生优势。在品种愈伤与不定芽生长差异对照中发现16种草莓类型:NOR156，NOR164，NOR1,NOR118,NOR147,ES8,ES6,ES12,LIT1,LIT7,FIN53,SL01,IT18,IT20，IT1，IT6。其中ES8类型草莓在各类外植体来源不同的情况下，都具有相对突出的不定芽生长能力。在探究各草莓苗离体叶片SOD与POD关系时，SOD未体现出显著性差异，POD试验里，ES8也体现了相对较高的POD含量。

目录

声明

摘要

缩略词表

引言

第一章文献综述

1课题的提出

2 草莓离体组织培养研究进展

2．1植物组织的全能型与离体再生

2．2草莓不同部位的离体再生培养

2．3草莓离体再生能力影响因素

3组织培养过程中的常见问题

3．1污染

3．2褐化

3．3玻璃化

第二章草莓苗的移栽与初步筛选

摘要

1材料与方法

1．1试验材料

1．2试验方法

2结果与分析

3讨论

4小结

第三章引起草莓组织培养污染的原因分析

1材料与方法

1．1试验材料

1．2试验方法

2结果与分析

2．1外植体的消毒处理

2．2外植体离体时间与污染或死亡率的关系

2．3污染情况观察记录与统计

3讨论

3．1关于消毒处理方法对茎尖外植体成活率的影响

3．2外植体离体时间与污染或死亡率的关系

3．3污染死亡情况观察与分析以及可能的抗污染方案。

4小结

第四章优势再生能力草莓类型筛选

1材料与方法

1．1试验材料

1．2试验方法

1．3数据分析方法

2结果与分析

2．1无菌苗的快繁

2．2匍匐茎扦插快繁与生长观测

2．3培养环境对组培苗发育的影响

2．4不同草莓类型组培苗与扦插苗叶柄愈伤及不定芽生长对比

2．5不同草莓类型组培苗与扦插苗叶盘愈伤及不定芽生长对比

2．5不同草莓类型扦插苗叶片POD／SOD酶活性测量

3结论与讨论

参考文献

全文总结

1．草莓苗种苗繁育与初步筛选

2．草莓组培过程中污染问题的探究及解决方案

3．优势愈伤及再分化能力草莓品种挑选以及高效愈伤不定芽体系构建

主要创新点

附录

致谢