氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条的研制

摘要

氯霉素(CAP)，是高效广谱抗生素，因其价格低廉，抑菌效果显著等特点，常用于畜牧业和食品加工业中。然而，由于该药苯环上带有有毒的硝基基团且分解半衰期较长，因而CAP的残留对机体有很大的毒副作用，如抑制骨髓造血机能引起再生障碍性贫血、具有生殖毒性、神经毒性等。为了保障人类的身体健康，国际上许多国家已经禁止CAP在动物源性食品中使用，中国农业部也将CAP列为禁药。虽然各国对CAP的残留作出了严格规定，但有关CAP超标的新闻层出不穷，因此为了严格监控CAP的使用，急需建立快速便捷、高灵敏度、适用于现场检测的CAP残留分析方法。量子点(QD)作为一种新型荧光纳米材料，具有非常优异、独特的荧光特性，在各种分析检测中，作为标记物而广泛应用，备受人们的关注。而将大量的QDs偶联起来形成微球状的量子点微球(QBs)则可大大提高其荧光强度和光学稳定性。因此本论文以量子点微球为标记物建立量子点微球标记氯霉素单克隆抗体的荧光试纸条的方法，应用于实际牛奶样品的检测。 1、氯霉素完全抗原的制备与鉴定 通过羰基二咪唑法和碳二亚胺法将CAP与分别蛋白载体BSA和OVA偶联，制备全抗原CAP-BSA、CAP-OVA、CAP-HS-BSA和CAP-HS-OVA。通过紫外扫描法和SDS-PAGE电泳技术鉴定其偶联成功。由BCA法测定全抗原的浓度分别为:CAP-BSA为6.8mg/mL,CAP-OVA为8.12mg/mL,CAP-HS-BSA为7.5mg/mL,CAP-HS-OVA为0.65mg/mL。通过紫外分光法测全抗原的偶联比，结果为CAP-BSA为5∶1，CAP-OVA为2∶1，CAP-HS-BSA为13∶1，CAP-HS-OVA为19∶1。 2、量子点微球探针的制备 通过优化偶联剂的比例为1∶1、pH值为7.4、QBs和抗体的质量比为7.5∶1，成功地将QBs和CAP单克隆抗体结合制备成QBs荧光探针。实验还确定了该探针最佳的保存温度为4℃，最佳的探针稀释液为1.5％PVA(w/v)+PBS（0.01mol/L pH7.4）。 3、氯霉素量子点微球免疫层系试纸条的组装与质量控制 本研究以羧基化QBs为标记物，通过碳二亚胺(EDC)法偶联CAP单克隆抗体制备荧光探针;进一步将0.6mg/mL氯霉素全抗原CAP-HS-BSA及0.4mg/mL羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维素膜上，形成检测线（T线）和质控线（C线），最终组装出新型氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条;并建立了基于该试纸条的快速、定量检测牛奶中CAP的方法。本研究开发的QBs试纸条可在15min内完成样品的检测，检测范围为0.1-100μg/L，检测限为0.1μg/L。加标回收实验表明，该试纸条的回收率为为93.3％-112.3％，相对标准偏差为3.1％-6.87％。

目录

声明

摘要

缩略词

第一章氯霉素的研究进展

1氯霉素的概述

1．1理化性质

1．2药理作用

1．3药动学特点

2 CAP残留的危害及残留现状

3 CAP残留的检测方法

3．1微生物法

3．2仪器分析法

3．3免疫检测技术

4．1戊二醛法

4．2重氮化法

4．3碳二亚胺法

4．4混合酸酐法

4．5羰基二咪唑法

4．6羧甲氧羟胺法

5．1量子点的概述

5．2量子点免疫荧光试纸条的基本原理

5．3量子点免疫荧光试纸条的应用

5．4量子点免疫荧光试纸条检测方法的优点

5．5量子点微球

6本课题研究目的及意义、主要内容

6．1研究的目的及意义

6．2研究的主要内容

第二章氯霉素全抗原的制备与鉴定

1实验材料

1．1药品与试剂

1．2仪器与设备

1．3试剂的配置

2试验方法

2．1碳二亚胺法合成全抗原

2．2羰基二咪唑法合成全抗原

2．3全抗原的鉴定

3结果与分析

3．1半抗原CAP-HS的合成与鉴定

3．2全抗原的合成与鉴定

4讨论

参考文献

第三章氯霉素抗体-量子点微球免疫荧光探针的合成

1实验材料

1．1药品与试剂

1．2仪器与设备

2试验方法

2．1制备氯霉素单克隆抗体

2．2 CdTe／ZnS QDs-CAP荧光探针的制备

2．3反应条件对偶联效果的影响

2．4 QBs探针的鉴定

2．5 QBs探针荧光稳定性

3结果与分析

3．1反应条件对偶联效果的影响

3．2量子点探针的鉴定

3．3 QBs探针的荧光稳定性

4讨论

参考文献

第四章氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条的组装与质量控制

1．1药品与材料

1．2仪器与设备

2试验方法

2．1试纸条的组装

2．2试纸条组成材料的确定

2．3免疫层析条件的确定

2．4试纸条的评价

3．1试纸条组装材料的确定

3．2免疫层析条件的确定

4讨论

参考文献

全文总结

致谢

硕士期间发表论文