银杏叶提取物抑制高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞肥大和细胞外基质的堆积

摘要

目的:1.研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,GBE)对高糖培养的肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)细胞周期的影响，进而明确其是否有抑制细胞肥大作用。 2.以卡托普利为对照药，探索GBE对Ⅳ型胶原和层粘蛋白、Smad2／3蛋白、Smad7蛋白、TGF-β<,1>mRNA的影响，也即对TGF-β<,1>/Smads信号异常所致的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)表达增多的作用。 3.探索GBE对高糖培养的MC氧化应激状态的影响及后者与ECM的关系，从而进一步探索GBE对氧化应激与TGF-β<,1>／Smads信号异常这两者引起的ECM堆积之间的关系。 方法: 1.大鼠肾小球系膜细胞株的培养。大鼠MC分为正常对照组、溶媒对照组、高糖组、GBE低浓度组，GBE中浓度组，GBE高浓度组，卡托普利对照组。 2.流式细胞术测定细胞周期。 3.免疫细胞化学测定Smad2／3蛋白和Smad7蛋白。 4.放射免疫法测定细胞浆内的Ⅳ型胶原和层粘蛋白(即ECM)。 5.RT-PCR法测定细胞TGF-β<,1>mRNA表达。 6可见光分光光度法测定胞浆CAT,GSH-Px,T-AOC和T-SOD四大抗氧化指标的水平。 结果： 1.与高糖组相比，GBE低中高浓度组的G<,o>／G<,1>期均有显著降低，S期细胞比例也分别有不同程度的升高(P<0.05 or P<0.01)，这种改变是浓度依赖性(│r│)0.999)。卡托普利组未见显著性作用。 2.与高糖组相比，GBE低中高浓度组均大大降低了细胞内Smad2／3蛋白的表达；高浓度组GBE显著性增加细胞内Smad7蛋白的表达(P<0.01)。GBE低中高浓度组层粘蛋白的表达有显著性降低，与高糖组相比皆有显著性差异(P<0.05 orP<0.01)；GBE中高浓度组的Ⅳ型胶原有显著性降低。GBE高浓度组的TGF-β<,1>mRNA的表达较高糖组显著性降低(P<0.05)。卡托普利组可明显降低Ⅳ型胶原和层粘蛋白的含量及TGF-β<,1>RNA的含量(P<0.05 or P<0.01)。 3. GBE高和(或)中浓度组显著提高了胞浆CAT，GSH-Px，T-AOC和T-SOD的水平，卡托普利仅提高CAT，GSH-Px的水平。 结论: 1. GBE在大鼠MC上具有升高细胞的S期百分数，从而抑制细胞肥大，具有保护细胞作用。 2.GBE能明显抑制高糖环境下TGF-β<,1>／Smads信号异常所致的Ⅳ型胶原和层粘蛋白的大量表达。 3.GBE有很强的抗氧化和抗纤维化能力。 4.GBE一方面通过其抗氧化作用抑制了TGF-β<,1>／Smads信号的异常；另一方面通过其抑制TGF-β<,1>／Smads信号作用而抑制氧化应激的产生，两者共同抑制了ECM的表达。 总之，相对于对照药卡托普利，GBE对以上指标的作用更为广泛。GBE能抑制高糖培养的MC的肥大和ECM的积聚，这对于延缓糖尿病肾病肾小球硬化有重要的意义。

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糖尿病肾病中转化生长因子-β1信号转导与肾纤维化

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