银杏叶标准提取物对急性期梗死心肌移植骨髓间充质干细胞的保护作用

摘要

目的: 探讨银杏叶标准提取物EGB761（extract of Ginkgo Biloba，EGB761）对大鼠急性期梗死心肌（acute myocardial infarction，AMI）移植骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）的心肌微环境、移植BMSCs的存活、分化及心功能的影响。
　　 方法：建立大鼠MI模型，5-0医用无损伤缝线结扎冠状动脉左前降支(left anterior descending，LAD)上中1/3 交界处，以心电图显示ST段抬高和肉眼可见左心室前壁暗紫为模型制作成功。经心外膜下直接注射经PKH-26标记的SD大鼠BMSCs作为移植供体细胞（1×105cells）。
　　 将上述动物随机分为两组，A组：（EGB761处理组）细胞移植＋EGB761腹腔注射（100mg/kg.d）；B组：（对照组）：细胞移植＋生理盐水腹腔注射（注射体积同EGB761处理组），每组15只。
　　 各组于术后1d、2d、7d取材。HE染色观察心肌梗死区及边缘区炎性细胞浸润，酶促反应和氧化产物吸光度法检测梗死心肌超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和氧化应激产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，Western Blot法检测组织中凋亡相关蛋白Fas表达、Tunel法检测梗死心肌中移植细胞凋亡情况，免疫荧光双标法观察梗死心肌中移植细胞的分化，同时，测定给药后大鼠心功能变化。
　　 结果：
　　 1. HE染色观察显示，术后1d、2d、7d，实验组梗死心肌组织炎症细胞浸润逐渐减轻，对照组梗死心肌组织炎症细胞的浸润则进行性加重；于术后相应的时间点，与对照组比较，实验组中炎症细胞浸润明显减轻，差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　 2. 酶促反应和氧化产物吸光度检测结果显示，术后1d、2d、7d，实验组梗死心肌组织SOD活性逐渐升高，而对照组梗死心肌组织中SOD活性逐渐降低；于术后相应的时间点与对照组比较，实验组SOD活性显著升高（P＜0.05）。
　　 术后1d、2d、7d，实验组梗死心肌组织中MDA含量渐减少，对照组梗死心肌组织中MDA含量渐增多；于术后相应的时间点，与对照组比较，实验组MDA含量明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 3. Fas蛋白检测结果显示，术后1d、2d、7d，实验组Fas蛋白的表达逐渐减少，对照组Fas蛋白的表达逐渐增多；于术后相应时间点1d、2d、7d，与对照组比较，实验组Fas蛋白的表达明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 4. 移植的BMSCs凋亡比率测定结果，术后1d、2d、7d，两组中移植的BMSCs凋亡比率渐增加；于术后相应时间点1d、2d、7d，与对照组比较，实验组梗死心肌中BMSCs的凋亡比率明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 5. 移植的BMSCs分化检测结果，实验7d组BMSCs胞浆中有cTnI表达，而对照组BMSCs胞浆中未见cTnI表达。
　　 6. 移植BMSCs心肌梗死大鼠的心脏功能测定结果，术后1d、2d、7d，实验组左室±dp/dtmax逐渐增加，对照组中大鼠左室±dp/dtmax逐渐降低；于术后相应时间点1d、2d、7d，与对照组比较，实验组左室±dp/dt增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 结 论:
　　 1. EGB761可减轻急性期梗死心肌移植BMSCs心肌局部的炎症及氧化应激反应，减少移植BMSCs凋亡。
　　 2. EGB761可促进急性期梗死心肌移植BMSCs向心肌细胞方向分化。
　　 3. EGB761可改善急性期梗死心肌移植BMSCs大鼠的左室功能。