非竞争性NMDA受体拮抗剂引发小鼠行为学变化及前脑内即早基因的表达

摘要

目的: 应用亲和力不同的NMDA非竞争性受体拮抗剂MK-801(地卓西平马来酸盐)和Amantadine(金刚脘胺)作用于小鼠，采用量化的行为学检测指标，比较两种药物引起的行为学表现差异；运用免疫组织化学法检测脑内两种及早基因蛋白c-Fos和FosB/△FosB蛋白的表达情况和两种药物之间的表达差异；用免疫荧光组织化学双标法对阳性表达神经元进行定性分析，试图根据两种药物所引发脑功能活动的形态学表现来探讨精神分裂症各假说之间的内在联系。 方法: 雄性昆明小鼠156只，随机分为4组：①生理盐水组(36只)；②MK-801组(40只)；③Amantadine(5mg/kg)组(40只)；④Amantadine(15mg/kg)组(40只)。各组实验小鼠给药前半数强迫游泳实验，半数一次性被动回避反应学习能力训练；给药第一天移动行为、刻板行为检测；给药第二天分别进行强迫游泳实验和一次性被动回避反应记忆能力检测；给药第三天2h后常规灌注固定、取脑，做连续冠状冰冻切片，片厚40um。将切片分别行FosB/△FosB和c-Fos免疫组织化学染色、连续贴片。显微摄像，计算机图像处理，绘制阳性细胞在前脑的分布模式图，计数阳性细胞在各核团的分布密度。结果采用SPSS13.0统计软件分析，数据以均数±标准差(mean±SD)表示，实验组与对照组之间的比较采用t检验。以P<0.05表示在统计学上有显著差异，P<0.01表示在统计学上有极显著差异。 结果: 1.MK-801与Amantadine引发小鼠行为学表现强度不同：MK-801可引起小鼠同时出现较典型的类似精神分裂症的阳性症状、阴性症状及认知功能缺陷表现，而Amantadine所引发的小鼠行为学表现却与对照组之间无统计学意义。 2.MK-801与Amantadine引发小鼠脑c-Fos表达的异同：MK-801引起实验小鼠前脑内前额皮质、梨状皮质、扣带皮质c-Fos的表达较多，c-Fos表达最集中的部位为丘脑各核团，包括丘脑中线核群、板内核群、网状核等。属于前脑的隔区、杏仁核群c-Fos的表达也较多，而嗅结节、伏隔核、尾壳核几乎没有表达。5mg/kg，15mg/kg剂量的Amantadine引起c-Fos表达呈剂量相关性，与生理盐水对照组相比，增加明显。在丘脑核团，Amantadine引起的c-Fos的表达较少，与MK-801组相比，差别较大。 3.MK-801与Amantadine引发小鼠脑FosB/△FosB表达的异同：MK-801引起实验小鼠的前脑内FosB/△FosB蛋白较多表达，主要集中在伏隔核、嗅结节、隔区、梨状皮质、终纹床核等核团。5mg/kg,15mg/kg剂量的Amantadine呈剂量相关性的引起FosB/△FosB蛋白的表达，核团分布与MK-801一致，但在数量上与MK-801组存在差异。非竞争性NMDA受体拮抗剂引起实验小鼠FosB/△FosB蛋白的表达在D3R分布集中的核团最多，这为我们了解精神分裂症中谷氨酸和多巴胺异常尤其是D3R表达增多之间的关系提供了依据。 4.MK-801与Amantadine引发小鼠脑及早基因表达神经元的性质差异：在免疫荧光组织化学双标实验中，梨状皮质区c-Fos与钙结合蛋白PV、CB的双标提示此区的中间神经元可能参与了精神分裂症的急性变化。 结论: MK-801是理想的致精神分裂症动物模型药物，梨状皮质、前额皮质、隔区、丘脑等核团可能参与了精神分裂症的急性变化中，而伏隔核、嗅结节等核团可能参与了慢性病理变化过程，并可能是谷氨酸与多巴胺在精神分裂症的发病中相互作用的核团。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

实验部分

实验一 MK-801和Amantadine引发小鼠的行为学变化

实验二 MK-801和Amantadine引发小鼠前脑内FosB/△FosB和c-Fos蛋白的表达

实验三 MK-801引发实验小鼠前脑梨状皮质FosB/△FosB和c-Fos蛋白表达的免疫荧光组织化学双标实验

讨论

结论

论文图片

参考文献

综述 精视分裂症与中枢神经递质功能紊乱

攻读硕士学位期间发表的论文

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