Bim介导FOXO3a对U251胶质瘤细胞凋亡作用的体外实验研究

摘要

目的: 观察沉默Bim 表达对重新激活FOXO3a 的U251 脑胶质瘤细胞凋亡的影响及凋亡相关蛋白Bim、caspase3 的变化，探究FOXO3a 对人脑胶质瘤U251 细胞凋亡影响的作用机制，为胶质瘤基因治疗提供理论依据。
　　 方法:
　　 1. pcDNA3.1-FOXO3a 真核表达载体经Nco Ⅰ、Hind Ⅲ酶切后鉴定。
　　 2. U251 胶质瘤细胞培养、传代。
　　 3. U251/FOXO3a 细胞被随机分为四组：对照组，脂质体组，siRNA 阴性对照组及实验组；实验组采用阳离子脂质体法将Bim siRNA转染入经4-OH Tamoxifen 诱导的U251/FOXO3a 细胞，分别于转染后24 h、48 h、72 h 收集细胞，Western blot 检测FOXO3a、Bim、caspase3 的表达，Hoechst33258染色试剂盒及流式细胞仪（Fluorescein Activated Cell Sorter，FACS）检测细胞凋亡情况。
　　 结果:
　　 1. pcDNA3.1-FOXO3a 真核表达载体转染U251 细胞，经G418 筛选获得稳定表达非磷酸化型FOXO3a 的U251/FOXO3a 细胞株。
　　 2. Western blot 检测结果显示：Bim siRNA 转染4-OH Tamoxifen 诱导的U251/FOXO3a 细胞后24 h、48 h、72 h，与对照组相比，实验组FOXO3a 表达水平差异无统计学意义（P>0.05），Bim、caspase3 表达水平较低（P＜0.05），至48 h 蛋白表达水平达最低。
　　 3.Hoechst33258 染色及FACS 检测细胞凋亡率显示：Bim siRNA 转染FOXO3a/U251细胞后24 h、48 h、72 h，细胞凋亡率均低于对照组（P＜0.05），实验组各时间点差别无统计学意义。
　　 结论:
　　 1. 获得稳定表达非磷酸化型FOXO3a 的U251/FOXO3a 细胞株。
　　 2. 成功沉默前凋亡蛋白Bim 的表达。
　　 3. 抑癌基因FOXO3a 可能通过上调Bim 的表达发挥促脑胶质瘤细胞凋亡作用。