Rho激酶在凝血酶诱导的小胶质细胞激活中作用的研究

摘要

目的：通过观察凝血酶(Thrombin)、凝血酶抑制剂阿加曲班、Rho激酶抑制剂Y-27632对新生鼠皮层小胶质细胞Rho激酶表达的影响以及其对于小胶质细胞的激活作用，探讨Rho激酶在凝血酶诱导小胶质细胞激活中的作用机制。
　　 方法：1．将体外培养的新生SD大鼠(3天内)大脑皮层小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶组，并按照凝血酶的不同浓度，又将凝血酶组分10U/ml,20U/ml，40U/ml,60U/ml四个亚组，作用6小时后，应用western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况。2．将小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶组(20U/ml)，并按照凝血酶(20U/ml)的不同作用时间随机分为3小时，6小时，12小时，24小时四个亚组，应用western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况。3．将小胶质细胞随机分为对照组和凝血酶(20U/ml，24小时)组，然后按照同浓度、同时间(20U/ml，24小时)的实验条件，将凝血酶组分为Thrombin、阿加曲班、Y-27632三个亚组，其中阿加曲班、Y-27632组分别为阿加曲班和Y-27632预处理半小时后再与凝血酶共孵育24小时，然后用免疫荧光和western-blot技术观察不同组别小胶质细胞Rho激酶的表达情况，通过显微镜观察小胶质细胞的形态，硝酸还原酶法和ELISA法检测各组培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况，以激光共聚焦，中性红吞噬实验检测小胶质细胞的吞噬能力。将以上结果进行统计学分析。
　　 结果：1．与对照组相比，不同浓度凝血酶与小胶质细胞共孵育后，浓度在20U/ml时，小胶质细胞Rho激酶表达显著增加(P＜0.05)。2．与对照组相比，凝血酶在作用24小时后，小胶质细胞Rho激酶表达显著增加(P＜0.05)。3．与对照组相比，凝血酶在浓度20U/ml，作用24小时时，Rho激酶表达显著增加且NO和TNF-α的表达量显著增加(P＜0.05)，吞噬能力增强(P＜0.05)；与凝血酶组(20U/ml，作用24小时)相比，阿加曲班和Y-27632组Rho激酶、NO和TNF-α的表达量明显减少(P＜0.05)，吞噬能力减弱(P＜0.05)。
　　 结论：1.凝血酶通过上调Rho激酶表达，介导小胶质细胞激活。
　　 2.阿加曲班、Y-27632对凝血酶诱导的小胶质细胞激活有抑制作用。

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前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

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参考文献

Rho激酶与神经系统疾病 综述

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

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