17β-雌二醇后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制研究

摘要

目的:研究17β-雌二醇后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并初步探讨其机制。
　　 方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞系(GES-1),建立缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测细胞活力,可见光分光光度法测定胞浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)水平,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化,PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率,免疫印迹法测定胞浆Bcl-2、Bax的表达,免疫细胞化学法检测VP1、SP的表达。
　　 结果:
　　 1.MTT检测显示,与正常组比较,缺氧/复氧显著降低细胞存活率(P＜0.01),17β-雌二醇后处理的细胞存活率明显升高差异具有统计学意义(P＜0.05),其中剂量为10-6mol/L的17β-雌二醇作用最为显著(P＜0.01),因此,在以后的实验中我们采用10-6mol/L作为用药剂量。
　　 2.17β-雌二醇后处理能降低细胞MDA含量,提高SOD活性,差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3.雌激素受体拮抗剂Fulvestrant能翻转17β-雌二醇后处理的保护效应,Ful+EP与EP比较:细胞存活率降低;阳性凋亡细胞增加;细胞凋亡率增加;Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4.17β-雌二醇后处理能上调VR1,P物质蛋白的表达。免疫细胞化学检测显示,正常GES-1细胞表达VR1、P物质,17β-雌二醇后处理能显著上调VR1、P物质的表达。
　　 5.辣椒素受体拮抗剂Capsazepine、P物质受体拮抗剂Spantide均能消除17β-雌二醇后处理的保护效应,C+EP,S+EP与EP比较,细胞存活率降低;阳性凋亡细胞增加;细胞凋亡率增加;Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1.17β-estradiol后处理能明显减轻缺氧/复氧诱导的GES-1细胞凋亡。
　　 2.17β-estradiol后处理能提高SOD活性,降低MDA含量。
　　 3.雌激素受体可能介导了17β-estradiol后处理对GES-1缺氧/复氧损伤的保护作用,可能引起细胞内抗凋亡信号通路的激活,抑制细胞凋亡。
　　 4.VR1可能参与了17β-estradiol后处理对人GES-1缺氧/复氧损伤的保护作用,促进内源性SP的合成与释放,与其受体结合引起细胞内抗凋亡信号通路的激活,从而抑制细胞凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

前言

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

讨论

结论

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参考文献

综述:辣椒素受体与胃保护

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

致谢