卡巴胆碱后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制研究

摘要

目的：探讨卡巴胆碱后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并初步探讨其机制。
　　方法：体外培养人胃黏膜上皮细胞系(h-GES-1)，建立胃缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤模型。实验分组如下:正常对照组(N)、2h缺氧/8h复氧组(H/R)、DMSO溶剂后处理对照组（V-P）、10-4 mol/L卡巴胆碱后处理组(CAR-P)、M受体拮抗剂atropine+卡巴胆碱后处理组（A+CAR-P）、辣椒素受体拮抗剂capsazepine+卡巴胆碱后处理组(C+CAR-P)和ERK通路阻滞剂PD98059+卡巴胆碱后处理组(PD+CAR-P)。采用MTT法检测细胞存活率，Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化，PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率，可见光分光光度法测定胞浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenate，LDH)漏出量，免疫细胞化学法检测辣椒素受体的亚型1(vanilloid receptor subtypel，VR1)及降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)的表达，免疫印迹法测定胞浆Bcl-2、Bax、磷酸化细胞外信号转导激酶(phosphorylative extracellular signal-regulatedkinase，p-ERK)的表达。
　　结果：根据预实验结果，指定缺氧2h/复氧8h为随后实验中的缺氧/复氧模型，10-4 mol/L为本实验中卡巴胆碱的用药剂量。实验结果如下:(1)与H/R组比较，CAR-P组的细胞存活率升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率、阳性凋亡细胞数目及LDH漏出量减少(P＜0.05);VR1、CGRP、Bcl-2及p-ERK表达上调，Bax表达下调(P＜0.05);差异均具有统计学意义。提示卡巴胆碱后处理对缺氧/复氧诱导的h-GES-1细胞损伤具有保护作用。(2)与CAR-P组比较，A+CAR-P、C+CAR-P及PD+CAR-P组细胞存活率降低(P＜0.05);细胞凋亡率、阳性凋亡细胞数目及LDH漏出量增多(P＜0.05);VR1、CGRP、Bcl-2及p-ERK表达下调，Bax表达上调(P＜0.05);差异均具有统计学意义。提示M受体拮抗剂atropine(A)、辣椒素受体拮抗剂capsazepine(C)、ERK信号转导通路阻断剂PD98059(PD)能够消除卡巴胆碱后处理的保护效应。
　　结论：1.卡巴胆碱后处理能够明显减轻缺氧/复氧诱导的h-GES-1细胞损伤，使抗凋亡蛋白表达增加，促凋亡蛋白表达降低。2.M受体、辣椒素受体及ERK信号传导通路可能介导了卡巴胆碱后处理对h-GES-1细胞缺氧/复氧损伤的保护作用，从而抑制细胞凋亡。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 胆碱能抗炎通路在消化系疾病方面的研究进展

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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