模拟CO2气腹对人结肠癌细胞生长增殖内源性调控途径的研究

摘要

目的：本研究模拟腹腔镜手术建立体外人工气腹环境，通过对CO2处理组和对照组细胞的检测，对结肠癌细胞体外生物学行为的分析，从细胞分裂增殖的内源性调控途径方面来探讨CO2影响恶性肿瘤增殖的机制，为腹腔镜技术用于胃肠道恶性肿瘤的安全性作初步评价，并提供相关的实验室证据。
　　 方法：(1)模拟CO2手术环境，体外建立CO2气腹模型，分别在不同CO2人工气腹压力下作用于人结肠癌SW620细胞后，通过对不同时间段的细胞采用MTT比色法绘制细胞的生长曲线，流式细胞术检测细胞周期并计算增值指数(PI)，观察不同CO2气腹环境作用后人结肠癌SW620细胞体外生长增值情况。(2)免疫化学法和Western-blot技术检测不同时相点细胞周期调控因子CDK4、p21表达的变化，从细胞分裂增殖的内源性调控途径方面探讨CO2影响恶性肿瘤增殖的机制。
　　 结果：(1)MTT结果显示：在不同压力CO2气腹环境培养结肠癌SW620细胞4h后，细胞光吸收值(OD)在第1d和第2d,8mmHg组和16mmHg组与对照组相比较无明显差异（P＞0.05），在第3-5d,8mmHg组和16mmHg组与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；两CO2处理组间比较，第1-3d无明显差异，第4、5差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)不同压力CO2气腹环境处理结肠癌细胞SW620细胞1d后，G1期细胞比例从对照组57.50％分别升高到77.43％和72.26％，G1期细胞比例明显高于对照组；S期细胞明显减少，以第3d和第4d最为明显；CO2气腹处理后1-5d，结肠癌SW620细胞增值指数8mmHg组和16mmHg组与对照组相比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。(3)免疫化学法和Western-blot均显示CDK4和p21在结肠癌SW620细胞中存在阳性表达，CO2处理后第1d和第2d,CDK4和p21的表达两处理组和对照组比较无明显差异（P＞0.05），CDK4的表达在第3-5d处理组较对照组降低（P＜0.05），p21的衷达在第3-5d处理组较对照组升高（P＜0.05）；两CO2处理组间相比较，在第1d、2d无明显差异，第3-5d,两者比较有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：(1)结肠癌SW620细胞在不同气腹压力下处理后，8mmHgCO2气腹组和16mmHgCO2气腹对结肠癌SW620细胞的生长增殖均有抑制作用。(2)在第3-5d,CDK4在处理组表达降低，p21在处理组表达升高，说明CO2气腹对结肠癌SW620细胞抑制作用与影响细胞周期相关蛋白CDK4、p21有关，CO2可以通过影响结肠癌SW620细胞的内源性途径抑制其生长增殖。

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1 材料

2 方法

结果

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