CB2激动剂JWH015抑制炎性反应介导的NR2B活化对瑞芬太尼诱发痛觉过敏的影响

摘要

目的：探讨大麻素受体2(cannabinoid receptor2，CB2)激动剂JWH015抑制炎性反应介导的NR2B活化对瑞芬太尼诱发痛觉过敏的影响。
　　方法：72只雄性SD大鼠随机分成2大组：鞘内给药组和腹腔给药组。每大组又随机分为4小组，每小组9只：鞘内给药组分为对照组1(C1组)、切口痛组1(I1组)、瑞芬太尼组1(R1组)、瑞芬太尼+JWH015组(JR1组)；腹腔给药组分为对照组2(C2组)、切口痛组2(I2组)、瑞芬太尼组2(R2组)、瑞芬太尼+JWH015组(JR2组)。JR1组在造模前30 min鞘内注射10pgJWH015，C1、I1、R1组均鞘内给予20％的二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)溶液，容积均为10μl；而JR2组在造模前30 min腹腔注射100μg JWH015，C2、I2、R2组均腹腔给予4％的DMSO溶液，容积均为0.5ml。除C1/C2组外，其余各组均制作切口痛模型，R1/R2组和JR1/JR2组在造模的同时皮下泵注瑞芬太尼0.04 mg/kg，其余组皮下泵注生理盐水，容积均为0.4ml，30 min泵完。测量术前24 h及术后2、6、24和48 h大鼠手术切口同侧后爪的机械缩足反射阈值(Paw Withdrawal Mechanical Threshold，PWMT)及热缩足潜伏期(Paw Withdrawal Thermal latency，PWTL)。24 h和48 h行为学测定后，立即在七氟烷麻醉下取新鲜L4-5节段右背侧半脊髓，再用Western blot检测脊髓水平蛋白表达水平，包括神经胶质细胞(GFAP，星形胶质细胞标记；OX42，小胶质细胞标记)、促炎性细胞因子(TNF-a，IL-6)、NR2B总量和NR2B酪氨酸磷酸化的表达量。
　　结果：(1)痛行为学变化：与C1/C2组和基础值比较，I1/I2组术后2、6、24和48 h的PWMT(I1组7.86±0.74、7.93±0.78、8.42±1.68、8.68±1.61；I2组7.75±0.57、7.85±0.65、8.26±1.14、8.39±1.14)和PWTL(I1组15.17±1.25、15.53±1.38、16.96±2.27、17.79±1.00；I2组15.34±1.06、15.59±1.33、16.53±1.21、17.62±1.07)均降低(P<0.01)；与I1/I2组比较，R1/R2组术后2、6、24和48 h的PWMT(R1组6.24±0.69、6.36±0.76、6.35±0.98、6.82±0.93；R2组6.16±0.74、5.89±0.89、5.80±0.91、6.13±0.94)和PWTL(R1组12.87±1.49、12.71±1.57、13.57±1.04、13.52±1.28；R2组12.38±0.98、12.66±1.23、12.47±1.41、12.70±1.32)均明显降低(P<0.05)；与R1/R2组相比，JR1组从术后6 h的PWMT(8.67±1.28)g和PWTL(17.28±1.58)s开始明显升高(P<0.05)，与JR2组在术后6 h、24 h和48 h的PWMT(7.42±0.74，9.50±1.17，7.86±1.16)g和PWTL(16.63±1.28，19.53±1.63，17.18±0.90)s升高的结果一致。(2)Western blot结果分析：与对照组比较，右后足跖肌切口增加了脊髓背角神经胶质细胞[GFAP(24 h，1.02±0.05；48 h，1.18±0.01)和OX42(24 h，1.07±0.01；48 h，1.09±0.04)]、促炎性细胞因子[IL-6(24 h，0.66±0.04；48 h，0.90±0.02)和TNF-a(24 h，0.49±0.05；48 h，0.72±0.01)]及NR2B酪氨酸磷酸化(24 h，1.06±0.03；48 h，0.95±0.03)的表达水平(P<0.01)；与接受生理盐水比较，术中输注瑞芬太尼可明显增加脊髓背角浅层神经胶质细胞[GFAP(24 h，1.36±0.07；48 h，1.56±0.02)和OX42(24 h，1.29±0.01；48 h，1.36±0.02)]、促炎性细胞因子[IL-6(24 h，0.87±0.04；48 h，1.27±0.02)和TNF-a(24 h，0.68±0.05；48 h，1.05±0.05)]及NR2B酪氨酸磷酸化(24 h，1.40±0.02；48 h，1.31±0.05)的表达(P<0.01)；而预先给予JWH015可减少瑞芬太尼所引起的脊髓背角神经胶质细胞、促炎性细胞因子及NR2B酪氨酸磷酸化的高水平表达(P<0.01)。
　　结论：在瑞芬太尼诱发切口痛模型大鼠术后痛觉过敏中，(1)术后脊髓水平炎性反应增强；(2)术后脊髓水平NR2B酪氨酸磷酸化表达增加；(3)预先鞘内注射CB2选择性激动剂JWH015可有效缓解瑞芬太尼诱发的术后痛觉过敏及抑制脊髓水平炎性反应和NR2B酪氨酸磷酸化；(4)预先腹腔注射CB2选择性激动剂JWH015可以缓解瑞芬太尼诱发的术后痛觉过敏。