新生小鼠缺氧缺血性脑损伤中TLR4-TRIF信号通路的表达及其意义

摘要

目的：建立新生小鼠缺血缺氧性脑病模型；探讨TLR4-TRIF信号通路在此模型中TLR4、TRIF、IRF3、IFNβ的表达。为将来研究TLR4信号通路在新生儿缺血缺氧性脑病中的作用机制做初步的铺垫。
　　方法：将100只清洁级7日龄C57BL/6小鼠分为LPS+假手术组、LPS+缺血缺氧手术组，LPS+缺血缺氧手术组分为缺血缺氧1d、2d、3d、4d、7d。参照经典模型加以改进建立新生小鼠缺血缺氧性脑病模型，以鼠脑石蜡切片HE染色和测定鼠脑半球的重量确定模型是否成功。以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大脑皮质和海马中TLR4 mRNA、TRIFmRNA、IRF3mRNA的表达量。以Western=Blot检测IFNβ蛋白的表达。
　　结果：1.脑重量比较：1d脑重量比较：缺血缺氧(HI)组：右脑重量(0.131±0.014)重于左脑重量(0.095±0.012)，差异有统计学意义(P<0.05)。7d脑重量比较：HI：右脑重量(0.102±0.012)轻于左脑(0.151±0.014)，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　2.HE染色：假手术对照组：脑组织结构均清晰，细胞轮廓正常，核居中，核仁清洗，尼氏体均匀分布在核周围。H13d组：右脑海马CA1区、齿状回细胞坏死、核固缩、核碎裂、细胞溶解、消失，损伤的神经元核膜皱缩，染色质聚集，部分边集于核膜，内质网、线粒体肿胀消失。左脑组织结构清晰，细胞轮廓正常。
　　3.RT-PCR半定量测定显示：TLR4mRNA：与假手术组(0.401±0.017)相比，小鼠缺血缺氧1d(1.394±0.023)时表达量最高，后开始逐渐降低，到7d时(0.527±0.024)仍高于假手术组，差异均有统汁学意义(P<0.05)。TRIFmRNA：与假手术组(0.409±0.018)相比，1d时(0.459±0.020)开始升高，2d(0.842±0.017)达到高峰，后开始下降，7d(0.654±0.019)时仍比假手术组高，差异均有统计学意义(P<0.05)。IRF3mRNA：与假手术组(0.412±0.015)相比，缺血缺氧4d(0.842±0.026)时表达量最高，持续到7d时(0.752±0.016)仍处于较高水平。
　　4.Western-blot检测IFNβ蛋白表达量：IFNβ与假手术组相比，2d(0.824±0.032)达到高峰，后开始下降，7d(0.352±0.036)时仍比假手术组高。
　　结论：1.7日龄C57BL/6小鼠建立缺血缺氧模型符合新生儿缺血缺氧性脑病的病理变化，说明造模成功。
　　2.TLR4-TRIF通路参与了小鼠缺血缺氧性脑损伤的病理生理过程。