IGF-1对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠急性期下丘脑Cyt-C、Caspase-3表达及恢复期焦虑行为的影响

摘要

目的：
　　探讨胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1，IGF-1)对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）急性期下丘脑部位线粒体细胞色素C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及恢复期焦虑行为的影响。
　　方法：
　　采用改良Rice方法制备新生小鼠HIBD动物模型。将新生小鼠永久性结扎右侧颈总动脉后置于缺氧舱（含8％氧气和92%氮气）中持续缺氧2h。7日龄C57/BL小鼠126只随机分为对照组42只、HIBD组42只、HIBD+IGF-1组42只。对照组仅游离右侧颈总动脉，不结扎，不进行缺氧处理，HIBD+IGF-1组在HI后即刻给予腹腔内注射 IGF-1（50ug/Kg），HIBD组、对照组在 HI后即刻予腹腔注射等体积生理盐水。每组随机选取36只小鼠分别于术后0h、3h、6h、12h、24h、48h时点（n=6）取其脑组织标本，采用免疫荧光染色技术检测3组小鼠不同时点下丘脑区脑细胞线粒体Cyt-C、Caspase-3的表达。每组剩余6只小鼠，分别于日龄21d、28d、42d采用高架十字迷宫实验、空场实验测定小鼠焦虑行为。
　　结果：
　　1免疫组化
　　HIBD组Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值于术后3h时点开始升高，但与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），于 HI后24h达高峰，6h、12h、24h、48h四个时点Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值与对照组、HIBD+IGF-1组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。HIBD+IGF-1组各时点Cyt-C及Caspase-3免疫荧光OD值在6h、12h、24h、48h四个时点低于HIBD组，高于对照组，各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　2焦虑行为
　　①高架十字迷宫实验
　　P21、P28、P42时各组间开放臂停留时间的比率、开放臂进入次数的比率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中，HIBD组开放臂进入次数比率、开放臂停留时间的比率较对照组、HIBD+IGF-1组高，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组与 HIBD+IGF-1组开放臂停留时间的比率、开放臂进入次数比率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。P21、P28、P42时各组间进入开放臂和闭合臂的总次数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　②空场实验
　　P21、P28、P42时各组间中央区运动距离百分比、中央区运动时间比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中，HIBD组中央区运动距离百分比、中央区运动时间较对照组、HIBD+IGF-1组高，差异有统计学意义（ P＜0.05），对照组与HIBD+IGF-1组中央区运动距离百分比、中央区运动时间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。P21、P28、P42时各组间水平运动总距离比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　1.应用IGF-1干预治疗可以减少新生小鼠HIBD后下丘脑区Cyt-C及Caspase-3的表达；
　　2.缺氧缺血性脑损伤后C57/BL小鼠青春期焦虑行为减少，而应用外源性IGF-1干预可使其焦虑行为恢复至正常水平。

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1 前言

2 材料和方法

2.1 建立7日龄新生C57/BL小鼠HIBD模型

2.2 免疫荧光染色检测脑组织Cyt-C及Caspase-3的表达

2.3 小鼠恢复期焦虑样行为的检测

2.4 统计学处理

3结果

3.1免疫荧光染色

3.2高架十字迷宫测量小鼠焦虑样行为结果

3.3空场实验测量小鼠焦虑样行为结果

4 讨论

4.1缺氧缺血后的神经细胞凋亡

4.2HIBD对焦虑行为的影响

4.3高架十字迷宫实验和空场实验

4.4 IGF-1对HIBD后Cyt-C、Caspase-3表达及焦虑情绪的影响

4.5 展望

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述: 早产儿脑损伤的研究进展