RNA干扰抑制RPA70表达对食管癌细胞放射敏感性影响的体外实验研究

摘要

目的：观察RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1细胞中的表达情况；观察RPA70基因特异性反义寡核苷酸(AS-RPA-70)对食管癌TE-1细胞中RPA70的mRNA及其蛋白表达的影响；探讨特异性阻断RPA70基因表达后联合不同剂量的X线照射对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响。
　　方法：使用食管癌TE-1细胞株，利用RT-PCR和免疫组化法分别检测该细胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表达情况；使用脂质体2000介导，采用瞬时转染法转染RPA70特异性反义寡核苷酸(AS-RPA-70)及阴性对照寡核苷酸于食管癌TE-1细胞中，设实验组(RPA70基因特异性反义寡核苷酸)、阴性对照组(阴性对照寡核苷酸)、Mock组(加入转染试剂脂质体2000)及空白对照组(只加入无血清培养基Opti-MEM)，在24、48、72、96小时四个转染时间点进行观察；使用RT-PCR、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法分别检测各组、各时间段食管癌TE-1细胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表达情况；用CCK-8法、流式细胞仪分别检测AS-RPA-70转染后96h联合辐射对食管癌TE-1细胞增殖和凋亡的影响。
　　结果：RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1细胞中均有表达；RT-PCR、qRT-PCR法结果表明实验组转染后RPA70的mRNA含量在72h达到最低，Westernblot法结果表明实验组转染后RPA70的蛋白表达在96h达到最低，其他各对照组转染后RPA70的mRNA及其蛋白含量无明显改变；细胞增殖及凋亡分析结果示AS-RPA-70转染后96h联合放射可明显抑制食管癌TE-1细胞的增殖、诱导其凋亡，实验组的细胞抑制率和凋亡率明显高于各对照组。(P<0.05)
　　结论：1.食管癌TE-1细胞中存在RPA70的mRNA及其蛋白的表达
　　2.AS-RPA-70能够有效地抑制食管癌TE-1细胞的mRNA及其蛋白的表达
　　3.AS-RPA-70联合辐射可明显抑制食管癌TE-1细胞的增殖并诱导其凋亡