我国布-加综合征JAK2外显子点突变的研究及病例信息分析

摘要

目的：通过分析徐州及周边地区布-加综合征(BCS)患者JAK2外显子14中V617F点突变的发生率，在此基础上测定JAK2外显子12中547insL+I540-F47dup8、I540-N542delins、N542-E543del、E543-D544del、K539L、H538QK539L及F537-K539delinsL点突变的发生情况，为我国BCS的病因学研究提供新思路，为阐明BCS的发病机制和BCS的鉴别诊断及靶向治疗提供新方向。通过现场流行病学调查结合分析病例组病人一般资料和临床资料，为针对BCS的诊断、治疗、预后提供参考依据。
　　方法：本次研究采用实验室病因学研究、现场流行病学调查、病案分析相结合的方法。收集2010年7月至2011年8月徐州医学院附属医院介入科经确诊并住院的BCS患者120例作为病例组，同时筛选此期间徐医附属医院体检中心在年龄上与病例组相匹配的120例健康体检者作为对照组。对病例组和对照组每个研究对象各抽取外周静脉血2ml，从全血中提取DNA，设计引物，应用等位基因特异性聚合酶链式反应(AS-PCR)检测每个研究对象JAK2V617F、547insL+I540-F47dup8、I540-N542delinS、N542-E543del、E543-D544del、K539LH538QK539L及F537-K539delinsL共八个位点的突变情况，对突变阳性者进行实时定量PCR再次确定，并对所有阳性样本和随机抽取的部分阴性样本进行DNA扩增纯化后测序验证。每确诊一例BCS的同时即对其进行面对面的流行病学调查。跟踪收集病例组和对照组完整的病历资料和各项实验室检查指标。建立数据库并进行统计分析。
　　结果：1.病例组资料特点：患者年龄主要集中于30-50岁之间，职业多为农民，文化水平普遍偏低，经济状况以贫困为主。本次研究的120例BCS患者中下腔静脉型占42.5％(51/120)，混合型占40.0％(48/120)，肝静脉型仅占17.5％(21/120)，符合中国BCS的病理类型分布特点。2.实验室检查指标：病例组和对照组的血常规、生化检测(肝功能项目)、癌抗原检查的各项指标经比较均为P<0.05，差异有统计学意义。3.突变检测结果：经AS-PCR检测出10例BCS患者存在JAK2V617F点突变，同时进行实时定量PCR和测序验证后结果一致，经统计学检验病例组与对照组差异有统汁学意义。JAK2外显子12中K539L点存在5例突变，经统计学检验病例组与对照组差异无统计学意义。JAK2外显子12中其它6个位点在病例组和对照组中均未发现突变的存在。
　　结论：JAK2V617F点和JAK2外显子12中K539L点在中国BCS病人中突变率偏低，JAK2外显子12中其它6个位点突变率为零。在排除偏倚因素后，提示JAK2单基因突变机制可能不是我国BCS发病的主要原因，下一步的工作方向将是在扩大样本量重复验证本次研究结果的同时探索我国BCS其它方面的病因。