布地奈德干预对哮喘小鼠肺组织中IL-17和RORγt mRNA表达水平的影响

摘要

目的：通过研究哮喘模型外周血中Th17细胞百分率及肺泡灌洗液中IL-17水平、肺组织RORγt mRNA表达水平，以及给予布地奈德干预治疗后的影响，来探讨支气管哮喘的发病和治疗机制。
　　方法：健康雌性Ba1b/c纯系小鼠(徐州医学院实验动物中心提供)30只，6-8周龄，体重22-24g，普通级，按随机数字表法分为3组(每组10只)：(1)模型组及BUD治疗组：均于第0、7、14天给予OVA/Al(OH)3混合液0.2ml(内含OVA100μg，Al(OH)31mg)腹腔注射(i.p.，intraperitoneal)，第2l-26天每天将小鼠置于5L密闭容器中以2％的OVA生理盐水(NS，normal saline)溶液10ml雾化吸入激发30min或出现哮喘样发作为止。另外，治疗组于第0、1、7天及每次雾化前给予布地奈德雾化液5ml(含BUDlmg)，每次30min。(2)对照组则在致敏阶段以Al(OH)3替代OVA/Al(OH)3腹腔注射，在激发阶段以NS替代OVA雾化。各组于最后一次激发24h，即第27天处死动物进行各项检测。采用HE染色评价各组小鼠气道炎症程度；流式细胞术(FCM)检测各组小鼠外周血中Th17细胞数量的动态变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素-17(IL-17)水平；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织RORγtmRNA表达水平。
　　结果：1.小鼠临床表现及肺组织病理改变：模型组小鼠出现了烦躁不安，头面部抓挠，鼻扇，呼吸急促，前肢缩抬，反应迟钝，步态不稳，蛙跳等典型哮喘表现，严重者呼吸减慢或呼吸节律不整，口鼻轻度紫绀，四肢瘫软，行动迟滞或俯伏不动；连续激发后小鼠毛色失去光泽，取出动物可见遗留较多排泄物。治疗组小鼠症状表现较轻，24小时内精神，毛发，食欲均可获得不同程度上的恢复；对照组小鼠一般情况良好。光镜下，哮喘组小鼠肺泡间隔增宽，支气管管腔变小，管壁增厚，小血管及细支气管周围可见到大量炎症细胞浸润；BUD治疗组病理改变较模型组轻；对照组小鼠细支气管及肺泡结构基本正常，无明显炎症细胞浸润。2.小鼠外周血Th17细胞的百分率、占CD4+T细胞比例：模型组(5.09％±1.01％、22.66％±3.65％)明显高于正常对照组(2.19%±0.21％、7.90%±0.61％)，均为P<0.01；BUD治疗组(3.47％±0.77％、14.26±3.28％)比模型组降低，均为P<0.01。3.小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中IL-17水平：模型组较对照组明显增高(27.28±3.64pg/ml vs6.58±2.32 pg/ml，19.51±2.23 pg/ml vs5.49±2.62 pg/ml均为P<0.01)，BUD治疗组较模型组降低(12.04±2.28pg/ml vs27.28±3.64 pg/ml，9.82±1.94 pg/ml vs19.51±2.23 pg/ml，均为P<0.01)。4.小鼠肺组织中RORγt-actinmRNA比例：模型组(0.814±0.07)较对照组(0.33±0.02)明显增高，BUD治疗组(0.54±0.03)较模型组组降低，均为P<0.01。
　　结论：布地奈德可以通过抑制哮喘小鼠肺组织RORγt的表达，进而抑制Th17细胞增值，减少IL-17细胞因子释放，从而减轻哮喘气管炎性反应，达到改善哮喘炎症病理改变的效果。