脊髓和背根神经节酸敏感离子通道在大鼠骨癌痛中的作用

摘要

本文从以下两方面进行了阐述。
　　第一部分骨癌痛大鼠脊髓和背根神经节中ASICs表达的变化。
　　目的：观察骨癌痛大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglia，DRG)中酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels，ASICs)表达的变化，探讨其在大鼠骨癌痛中的作用。
　　方法：雌性SD大鼠(200±50g)，随机分为3组(n=20):空白对照组（C组）、假手术组（S组）、骨癌痛组（B组）。采用Walker-256乳腺癌细胞构建大鼠胫骨癌痛模型。B组在左胫骨上端注射5μl Walker-256细胞;S组在左胫骨上端注射5μl热灭活的Walker-256细胞;C组不予任何处理。于术前1d、术后1d、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d测定各组大鼠机械性缩足阈值(mechanical withdrawalthreshold，MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency，TWL);于术后7d、14d、21d取脊髓和DRG标本，Western blot法分别检测脊髓中ASIC1a、ASIC2a、ASIC2b和DRG中ASIC1b、ASIC3通道蛋白的表达变化情况。
　　结果：(1) MWT:与C组比较，B组造模术后第5d、7d、9d、11d、14d、21d的MWT值降低(P＜0.05);与术前基础值比较，B组造模术后第5d、7d、9d、11d、14d、21d的MWT值降低（P＜0.05）。(2) TWL:与C组比较，S组和B组在造模术后第3d的TWL值降低(P＜0.05）;与术前基础值比较，S组和B组在造模术后第3d的TWL值降低(P＜0.05);其余各时点的TWL值与C组和基础值比较差异无统计学意义。(3) ASICs通道蛋白的表达水平:B组大鼠在术后7d、14d、21d脊髓ASIC1a、 ASIC2a和DRG中ASIC3的蛋白表达水平均较C组相应时间点高(P＜0.05)。
　　结论：骨癌痛大鼠脊髓ASIC1a、ASIC2a和DRG中ASIC3蛋白表达上调，脊髓和DRG ASICs可能参与骨癌痛形成。
　　第二部分鞘内注射ASICs抑制剂对骨癌痛大鼠痛阈及ASICs表达的影响。
　　目的：观察鞘内注射ASICs抑制剂阿米洛利对骨癌痛大鼠痛阈及ASICs表达的影响。
　　方法：雌性SD大鼠(200±50g)，鞘内置管成功后随机分为5组(n=14):假手术组（S组）、假手术+阿米洛利组(SA组)、骨癌痛组（B组）、骨癌痛+生理盐水组(BN组)、骨癌痛+阿米洛利组（BA组）。采用Walker-256乳腺癌细胞构建大鼠胫骨癌痛模型，方法同第一部分。造模成功后，于术后第7～9天，SA组和BA组每天1次鞘内注射阿米洛利(0.1mg/10μl)，BN组注射10μl生理盐水，S组和B组不作鞘内注射。于术前1d、术后1d、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d测定各组大鼠MWT和TWL;于术后14d取脊髓和DRG标本，Western blot法分别检测脊髓中ASIC1a、ASIC2a和DRG中ASIC3通道蛋白的表达变化情况。
　　结果：(1)MWT:与S组比较，B组、BN组、BA组在术后第5d、7d、9d、11d、14d、21d的MWT值降低(P＜0.05）;与术前基础值比较，B组、BN组、BA组在术后第5d、7d、9d、11d、14d、21d的MWT值降低(P＜0.05）。鞘内注射阿米洛利后，BA组在术后第7d、9d、11d、14d、21d的MWT值较B组升高(P＜0.05)。(2) TWL:术后第3d各组大鼠的TWL值较基础值降低(P＜0.05);各组大鼠TWL值组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。(3) ASICs通道蛋白的表达水平:B组、BN组、BA组脊髓ASIC1a、ASIC2a和DRrG中ASIC3的蛋白表达水平均较S组高(P＜0.05);鞘内注射阿米洛利后BA组脊髓ASIC1a、ASIC2a和DRG中ASIC3蛋白表达水平较B组降低(P＜0.05)。
　　结论：鞘内注射ASICs抑制剂阿米洛利能一定程度抑制脊髓和DRG ASICs通道蛋白表达，缓解大鼠的骨癌痛。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

第一部分 骨癌痛大鼠脊髓和DRG中ASICs表达的变化

材料和方法

结果

第二部分 鞘内注射ASICs抑制剂对骨癌痛大鼠痛阈及ASICs表达的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

酸敏感离子通道与疼痛

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

声明

论文审阅认定书