地塞米松对哮喘小鼠体内一氧化氮、一氧化氮合酶作用的实验研究

摘要

研究背景及实验目的：支气管哮喘是严重危害当代人健康的呼吸系统疾病，其以肺部嗜酸性粒细胞浸润、气道粘液增多及气道高反应性为主要特征，临床表现为反复发作的喘息、呼气性呼吸困难、胸闷、咳嗽等。当前哮喘发病有不断增多的趋势，因此探讨有效治疗哮喘的机制十分必要。 过敏原或感染等因素激发广泛分布于呼吸道粘膜以及肺间质内的树突状细胞，后者迁移至抗原引流淋巴结，将有关抗原提呈给T淋巴细胞，生成大量II型辅助型T细胞并分泌白介素4、5等Ⅱ型细胞因子，引起肥大细胞、嗜酸性粒细胞等释放炎症介质，诱发气道变应性炎症。过敏原、感染因素及相关细胞因子可刺激肺巨噬细胞、气道上皮细胞等表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)，后者催化L-精氨酸生成高水平一氧化氮(NO)。正常时气道局部构成型NOS(eNOS)催化生成的低水平NO可松弛支气管平滑肌，调节肺血流量，有利于呼吸正常进行。而哮喘时iNOS催化生成的高水平NO则被认为有利于气道炎症细胞浸润，并参与气道高反应性形成，从而促进哮喘病情发展。 当前，治疗哮喘最有效的药物仍是糖皮质激素。激素可以通过抑制哮喘发生发展中多种炎症介质的表达来实现抗炎及缓解哮喘症状的作用。而对于较晚被认识的iNOS及NO，糖皮质激素是否也通过抑制二者在气道局部乃至全身的产生从而实现对哮喘症状的抑制?本研究以卵白蛋白(OVA)致敏昆明小鼠建立哮喘模型，以不同剂量地塞米松治疗哮喘小鼠，然后检测小鼠肺组织和血清中的NO浓度以及iNOS水平，以探讨二者尤其是iNOS在激素抗哮喘机制中所起的作用，为更好的防治哮喘提供思路。 实验方法：将35只昆明小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松0.1 g/L治疗组组(C1组)、地塞米松0.2g/L治疗组(C2组)、地塞米松0.4g/L治疗组组(C3组)，每组7只。B组在实验的第0天、第7天、第14天用0.08％OVA0.2 ml(以氢氧化铝为佐剂)腹腔注射致敏，第15天起连续7天以1％OVA雾化激发，每次40分钟；C1、C2、C3组小鼠以同样方法致敏及激发，但每次激发前l小时分别雾化吸入0.1g/L、0.2 g/L、0.4g/L地塞米松10分钟；A组以无菌生理盐水代替OVA，操作与B组相同。末次激发后行如下操作：心脏采血制备血涂片；取支气管肺泡灌洗液(BALF)，观察其中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比(EOS％)；作肺组织病理学检查，行HE染色，观察各组肺组织炎性细胞浸润的情况；NO、NOS试剂盒检测血浆及肺组织中NO代谢产物含量及NOS活性；RT-PCR法检测肺组织iNOS mRNA表达。 结果：B组BALF细胞计数及肺组织切片均提示急性气道炎症性改变，血涂片也显示嗜酸性粒细胞增多；相比之下，C1、C2、C3组炎症状态明显较弱，尤以C2组明显，但与Cl、C3组差距无统计学意义。血清检测表明：B组NO代谢产物显著高于A组，Cl、C2、C3组NO代谢产物含量显著低于B组；而血清iNOS和eNOS活性各组间都无统计学差异。肺组织NO代谢产物含量及iNOS活性则均为治疗组高于哮喘组，而治疗组间无差异。RT-PCR结果表明：相比A组，B组肺组织iNOS mRNA的表达明显增高；而C1、C2、C3组的iNOS mRNA水平较B组明显降低，三组间无明显差异。 结论：地塞米松雾化吸入可抑制OVA所致的小鼠肺iNOS mRNA高表达，降低局部及全身的NO水平，从而并改善肺部变应性炎症，推测地塞米松等糖皮质激素药物治疗哮喘的机制与改善机体和组织NOS和NO代谢有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写索引

声明

第一章前言

第二章材料和方法

2.1材料

2.1.1 动物

2.1.2试剂

2.1.3主要仪器

2.2方法

2.2.1实验动物分组及实验动物模型制作方法及给药方法

2.2.2标本采集及制备

2.2.3标本检测方法

2.2.4统计分析

第三章结果

3.1实验动物一般情况

3.2血涂片观察

3.3 BALF中炎症细胞计数结果

3.4肺组织病理切片的结果情况

3.5 血清一氧化氮水平和一氧化氮合酶活性测定结果如下：

3.6肺组织一氧化氮水平和一氧化氮合酶活性测定结果如下：

3.7肺组织iNOS mRNA PCR结果

第四章讨论

参考文献

综述NO在支气管哮喘及治疗中的作用研究进展

致谢

在研究生期间发表的论文