我国部分地区携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌的分子流行病学研究

摘要

目的:了解我国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌中ystB基因携带情况，分析携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌菌株的其它毒力基因携带特征、生物型、血清型、分子分型以及抗生素敏感试验，对其分子流行病学特征开展全面调查。 方法:常规培养小肠结肠炎耶尔森菌，使用API20E反应条鉴定。PCR扩增所有菌株的ystB基因(必要时进行测序分析，并与GenBank公布的ystB基因：ACCESSION N0.D88145进行比对)。选择ystB基因阳性菌株进行以下分析：PCR法扩增毒力基因yadA、virF、ail和ystA，了解其毒力基因特征。胆汁七叶甙分解试验初步判断其生物型，需要是采用多种生化反应确认。玻片凝集试验分析待检菌株血清型。生物梅里埃ATBG-5试剂条分析菌株的抗生素敏感特征。脉冲场凝胶电泳试验进行分子分型，使用Bio-Numerics数据库软件对脉冲场凝胶电泳结果进行聚类分析。 结果:ystB基因在小肠结肠炎耶尔森菌的携带率为38.1％。所有携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌其它毒力基因(yadA、virF、ail和ystA)均为阴性。所有携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌均为生物1A型。250株携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌包含至少23种血清型，其主要血清型为0：6，30，其次为0：8、0：7，8、0：5。多数菌株对阿莫西林、头孢噻吩、替卡西林等抗生素耐药，所有菌株对环丙沙星以及阿米卡星敏感。脉冲场凝胶电泳共形成167个型别，依次命名为K6GN11CB0001-K6GN11CB0167。 结论：所有携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌均不携带其它毒力基因(yadA、virF、ail和ystA)。ystB基因仅存在于生物1A型小肠结肠炎耶尔森菌中。携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌的血清型组成较多，另外我国分离的O：8型小肠结肠炎耶尔森菌携带ystB基因而不携带其它毒力基因，且为生物1A型，完全不同于国外0：8型小肠结肠炎耶尔森菌特征。多数携带ystB基因的小肠结肠炎耶尔森菌对阿莫西林和部分头孢菌素类抗生素高度耐药，可能与这些菌株表达β-内酰胺酶有关。PFGE对携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌的分型表明这些菌株间带型差异较大，相互聚类关系不高，PFGE不能对携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌进行有效的分子分型。

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论文说明：英文缩写索引

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第一章绪论

1.1小肠结肠炎耶尔森菌的生物学特性

1.1.1概况

1.1.2致病性及其毒力因子

1.1.3生物1A型小肠结肠炎耶尔森菌的致病性

1.2小肠结肠炎耶尔森菌与分子分型技术

1.3生物1A型小肠结肠炎耶尔森菌的分子分型

1.4本研究的目的、意义、方法及实验方案的设计

第二章ystB基因在小肠结肠炎耶尔森菌中分布及ystB基因阳性菌株的毒力基因特征

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

第三章携带yesB基因小肠结肠炎耶尔森菌的生物分型、血清学分型及抗生素敏感试验

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

第四章携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌的脉冲场凝胶电泳分型

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

第五章 主要结论和展望

致谢

参考文献

附录

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