c-jun氨基末端激酶信号通路(JNK)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤作用的实验研究

摘要

目的:研究JNK细胞信号转导通路在肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)过程中的机制及JNK激酶抑制剂(SP600125)对缺血再灌注损伤后肝组织的保护作用,从而为临床上肝脏移植中出现的缺血再灌注损伤提供新的新的预防和治疗方法。
　　 方法:将30只SD雄性大鼠,重量为250-300g,随机分为3组:A:假手术组(SO),B:缺血再灌注组(IR)C:抑制剂组(SP)。其中A组仅行进腹,分离暴露肝门,不做血流阻断。B组行进腹,暴露肝门部血管,无损伤血管夹阻断肝左中叶的血供1H,复灌后2H取材。C组与术前半小时注射SP60012515mg·kg－1其他操作同B组。分别做如下检测:(1)HE染色观察肝组织结构的病理变化。(2)TUNEL法检测肝细胞的凋亡。(3)运用免疫组化法检测肝组织中p-JNK的表达(4)测定各组血清肝功能酶(AST,ALT)。(5)测定肝组织中MDA以及MPO含量检测。(6)ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。
　　 结果:①HE染色肝脏病理学改变:SO组镜下无明显病理学变化。IR组肝脏病理损伤较重,肝小叶结构严重破坏,肝细胞以及肝窦部血管内皮细胞高度水肿,变形,同时伴有炎性细胞的浸润。SP组肝细胞肿胀,肝脏呈淤血改变,肝细胞坏死不明显。②TUNEL法凋亡检测:SO组仅见少量肝细胞凋亡,IR组以及SP组肝细胞凋亡指数(AI)明显高于SO组(P<0.01),SP组肝细胞凋亡指数又低于IR组(P<0.05)。③免疫组织化学p-JNK的表达:SO组肝脏p-JNK基本无明显表达,IR组p-JNK在肝细胞浆和胞核中均有表达,且染色较深,而在SP组仅在细胞浆中表达,且表达比例较IR组低。④血清肝功能酶检测:相对于SO组,IR组以及SP组的肝功能酶水平均明显升高(P<0.01)。SP组较IR组偏低(P<0.01)。⑤肝组织MDA以及MP0测定:IR组,SP组MDA和MPO含量明显高于SO组(P<0.01)。但是SP组MDA和MP0含量则显著低于IR组。⑥血清IL-1β,TNF-α水平测定:IR组以及SP组IL-1β,TNF-α水平都明显高于SO组(P<0.01),但是SP组则低于SO组。(P<0.01～P<0.05)
　　 结论:(1)在肝脏缺血再灌注损伤过程中,JNK细胞通路被激活,p-JNK水平升高。(2)应用JNK激酶抑制剂SP600125干预后,p-JNK表达下降,肝细胞凋亡缓解,对肝脏缺血再灌注损伤有显著改善作用。(3)中性粒细胞浸润,细胞因子IL-1β,TNF-α等因素参与了肝脏缺血再灌注损伤诱发和进展的过程,且与JNK信号通路存在一定的联系。